[发明专利]食品中酪蛋白磷酸肽的检测方法

说明书

本发明涉及一种食品中酪蛋白磷酸肽的检测方法。其包括以下步骤：标准品的制备：以90％CPP为标准品I，加溶剂溶解，制备标准品溶液I；以20％CPP为标准品II，加溶剂溶解，制备标准品溶液II；试样前处理：向浓度为0.05g/mL‑0.1g/mL的试样的水溶液中，滴入体积浓度为40％‑60％的盐酸水溶液至产生沉淀，加水定容，离心，过滤，得试样溶液；测定：对所述试样溶液进行超高效液相色谱联用质谱检测，外标法定量；色谱条件包括有：色谱柱：C18130A色谱柱；流动相C为甲酸水溶液，流动相D为乙腈；梯度洗脱。上述检测方法可避免其他蛋白质、维生素等营养素对CPP检测结果的干扰，稳定、准确地检出食品中不同规格的CPP。

技术领域

本发明涉及检测分析领域，特别是涉及食品中酪蛋白磷酸肽的检测方法。

背景技术

酪蛋白磷酸肽(CPP)是以牛乳酪蛋白为原料，通过生物技术制得的具有生物活性的多肽。CPP分子由二十到三十几个氨基酸残基组成，其中包括4～7个成簇存在的磷酸丝酰基，可用于各种营养、保健食品中，能有效促进人体对钙、铁、锌等二价矿物营养素的吸收和利用。

由于CPP是一种蛋白水解的产物，将CPP加入到奶粉、牛奶等乳制品中后，乳制品还含有多种其他蛋白质、维生素，这些其他蛋白质、维生素会对CPP的检测造成干扰，不能稳定、准确的检测出CPP，导致食品中CPP的检测很困难。并且，当奶粉中CPP的添加量较低时，常规HPLC几乎检测不出来，同时，前处理速度慢，经常出现异常结果。此外，加入到食品中的酪蛋白磷酸肽一般有两种规格：20％CPP(纯度≥20％)和90％CPP(纯度≥90％)，两种CPP的组成成分不同，也为定性检测食品中的酪蛋白磷酸肽带来一定的困难。

发明内容

基于此，本发明提供一种食品中酪蛋白磷酸肽的检测方法，可避免其他蛋白质、维生素对CPP检测结果的干扰，能稳定、准确地检出食品中不同规格的CPP，且检出限低，前处理简单、迅速。

具体技术方案为：

一种食品中酪蛋白磷酸肽的检测方法，包括以下步骤：

标准品的制备：以90％CPP为标准品I，加溶剂溶解，制备标准品溶液I；以20％CPP为标准品II，加溶剂溶解，制备标准品溶液II；

试样前处理：向浓度为0.05g/mL-0.1g/mL的试样的水溶液中，滴入体积浓度为40％-60％的盐酸水溶液至产生沉淀，加水定容，离心，将上清液过滤，取滤液作为试样溶液；

测定：对所述试样溶液进行超高效液相色谱联用质谱检测，外标法定量；

色谱条件包括：色谱柱：C18色谱柱；流动相C为甲酸水溶液，流动相D为乙腈；梯度洗脱。

在其中一个实施例中，所述梯度洗脱具体为：

0-2min，所述流动相C 90％，流动相D 10％；

2min-15min，所述流动相C 90％→60％，流动相D 10％→40％；

15min-16min，所述流动相C 60％→10％，流动相D 40％→90％；

16min-20min，所述流动相C 10％，流动相D 90％；

20min-21min，所述流动相C 10％→90％，流动相D 90％→10％；

21min-25min，所述流动相C 90％，流动相D 10％。

在其中一个实施例中，所述甲酸水溶液的体积浓度为0.1％-0.5％。

在其中一个实施例中，所述C18色谱柱为Waters CSH 130C18。