[发明专利]用于水质净化的复合菌剂的制备方法

说明书

本发明属于微生物环保领域，特别涉及一种用于水质净化的复合菌剂的制备方法。本发明将植物乳杆菌与西姆芽孢杆菌按一定比例混合制备复合菌剂，具有优异降解效果。在接种量8％时，氨氮盐降解率为88.57％、亚硝酸盐氮降解率为97.87％、硝酸盐氮降解率为92.37％，能够显著降低水产养殖中氨氮、亚硝酸盐氮及硝酸盐氮等污染因子含量，有效的改善养殖环境，减少资源浪费。

技术领域

本发明属于微生物环保领域，特别涉及一种用于水质净化的复合菌剂的制备方法。

背景技术

随着水产养殖规模化、集约化及精养技术的发展，水体水质净化已成为水产养殖业中一个关键的问题。目前，在生产实践中对鱼类病害的防治主要采用施用抗生素或在饵料中添加抗生素的方法，不可避免导致抗生素残留问题，这也是目前水产品中抗生素超标事件频发的主要原因，严重影响了食品安全。此外，如何提高饵料营养利用率也是水产养殖业所面临的重要课题。由于某些微生物具有拮抗活性和水体净化作用而广泛应用于食品、药品、环境等领域。因此，通过微生物技术，在饵料中添加某些益生菌或通过向水体中投放环境净化微生物菌剂逐渐成为研究者和养殖业关注的热点。目前复合菌净化水质的研究主要集中在淡水养殖方面，赵亮等在河蟹养殖中施用光合细菌比对照组氨氮和硝酸盐氮分别降低了41.5％和41.4％一定程度改善了养殖水体水质，因此，本领域亟需一类高降解率的复合菌剂。

发明内容

为弥补现有技术的不足，本发明提供一种用于水质净化的复合菌剂的制备方法。本发明方法制备的复合菌剂可有效降低养殖水体中氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮等影响水质的含氮化合物含量，改善养殖水体水质。

本发明采用如下技术方案：用于水质净化的复合菌剂的制备方法，具体包括如下步骤：

S1.活化菌株

配置LB和MRS固体培养基，制作成斜面以及平板，分别将植物乳杆菌株与西姆芽孢杆菌株用竹签在斜面上划线，30℃培养，3～7d培养结束后，均放在4℃中保存备用；

S2.扩繁菌株

分别将活化后的植物乳杆菌株与西姆芽孢杆菌株用竹签挑取，按5-8％的接种量接种于LB或MRS液体培养基中，30℃恒温摇床培养24h，得到植物乳杆菌株与西姆芽孢杆菌液；

S3.菌悬液的制备

将植物乳杆菌与西姆芽孢杆菌液按(1-2)：1的体积比倒于离心管中，10000r/min10min离心，用无菌水将其混匀，配置成分布均匀的菌悬液，显微镜活菌计数，使其活菌数为10⁹cfu/mL。

所述步骤S1中植物乳杆菌株与西姆芽孢杆菌株于-80℃保存。

所述LB培养基(g/L)：蛋白胨10.0g，氯化钠10.0g，酵母提取物5.0g。灭菌前pH为7.2。

所述MRS培养基(g/L)：牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，蛋白胨10.0g，葡萄糖20.0g，K₂HPO₄2.0g，K₂HPO₄5.0g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，MnSO₄·4H₂O 0.05g，吐温801.0g，柠檬酸三铵2.0g。灭菌前pH为6.2～6.6。

优选的，接种量为8％。优选的，植物乳杆菌与西姆芽孢杆菌配比为2:1。

本发明同时请求保护上述方法制备的复合菌剂在水质净化中的应用。将上述方法制备的复合菌剂加入的待净化的水体中，对水中氨氮盐的降解率在第7d达到最高，亚硝酸盐氮的降解率在第3天即达到最高降解率，在第10天时对水中硝酸盐氮的降解率达到最高。