[发明专利]基于高效液相色谱对β乳球蛋白进行分型的方法

说明书

本发明涉及一种基于高效液相色谱对β乳球蛋白进行分型的方法，包括如下步骤：步骤S1：利用冷冻奶样制备分型样品；步骤S2：向高效液相色谱柱进样；步骤S3：分别在不同时间点以不同体积的洗脱液洗脱样品；步骤S4：根据分型样品洗脱后出峰的保留时间和峰面积参数将β‑乳球蛋白分型为A‑β乳球蛋白和B‑β乳球蛋白。本发明提供的基于高效液相色谱对β乳球蛋白进行分型的方法，重现性好，准确度高，能够实现对样品的批量检测，大大减少分析时间，而且方法简单易行，方便可靠。

技术领域

本发明涉及高分子液相分离技术领域，具体设计一种基于高效液相色谱对β乳球蛋白进行分型的方法。

背景技术

β乳球蛋白(β-lactglobμlin，β-Lg)是由乳腺上皮细胞合成分泌的一种特有乳清蛋白，是鲜奶中蛋白质的一种，占鲜奶蛋白质的7％-12％，主要存在于牛和其他反刍动物乳清蛋白中。自Aschaffenbμrg等发现β乳球蛋白存在A、B两种遗传变异体以来,研究人员对乳中主要蛋白质的遗传多态性进行了广泛而深入的研究。

研究结果一方面揭示了不同哺乳动物乳蛋白遗传变异体的类型以及存在的差异,为研究生物多样性、物种间的亲缘关系、进化等提供了有价值的资料；同时也显示了乳蛋白遗传多态性与动物的某些经济性状存在一定的相关性，如乳产量及其组成、乳的凝乳性能和加工特性等。因此，乳蛋白遗传多态性的研究就有理论意义和实际应用价值。

Mao(1992),Sacch(1993),等在对荷斯坦奶牛的研究中发现β-Lg基因型和乳脂率相关；Berg(1992)年发现在荷斯坦牛中β-Lg基因型和乳中酪蛋白总量相关。

发明内容

为了根据实际经济需要选择相应类型的乳蛋白，本发明提供了一种基于高效液相色谱对β乳球蛋白进行分型的方法，包括如下步骤：

步骤S1：利用冷冻奶样制备分型样品；

步骤S2：向高效液相色谱柱进样；

步骤S3：分别在不同时间点以不同体积的洗脱液洗脱样品；

步骤S4：根据分型样品洗脱后出峰的保留时间和峰面积参数将β-乳球蛋白分型为A-β乳球蛋白和B-β乳球蛋白。

其中，所述步骤S1包括：

步骤S11：向分装的冷冻奶样中加入等体积的第一工作液，样品融化后振荡10s混匀，室温静置1小时；

步骤S12：将步骤S11所得混合液于4摄氏度下，以16000g速度离心5分钟；

步骤S13：去除表层乳脂，将底层溶液置于新的离心管中；

步骤S14：以1：3的体积加入第二工作液以稀释步骤S13所获溶液；

步骤S15：过滤稀释液，得欲分型的样品。

其中，所述第一工作液由如下摩尔浓度的溶液混合制成：0.1mol/L双-三羟甲基氨基甲烷缓冲液、6mol/L盐酸胍、5.37mol/L柠檬酸钠以及19.5mol/L二硫苏糖醇。

其中，所述第二工作液为摩尔浓度为4.5mol/L的盐酸胍溶液，且第二工作液的溶液与洗脱时的第一洗脱液保持一致。

其中，所述步骤S2中的进样顺序包括：

步骤S21：进样前进行60分钟初始平衡，保证检测线和压力线均在平稳状态；

步骤S22：检测一针标准样品；

步骤S23：进一针第一洗脱液进行空白对照，确保正常情况下进行正常样本的检测；

步骤S24：进样品，并且，每三针样品进行一针空白对照。