[发明专利]一种对虾肠道肠球菌菌株及其筛选方法和应用

说明书

本发明公开了一种对虾肠道肠球菌菌株及其筛选方法和应用，特点是该菌株为NBU1菌株，分类命名为肠球菌（Enterococcussp.），于2018年11月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.16735，该菌株在制备金黄色葡萄球菌抑制剂和/或鳗弧菌抑制剂中以及在制备对虾养殖用益生菌添加剂中的应用，优点是对金葡萄球菌和鳗弧菌都具有较好的抑制作用，经和饲料发酵后饲养对虾可以提高对虾产量、成活率和饲料转化率，并可改善生病对虾的产量和成活率，可以作为一种高效绿色的饲料添加剂和抗生素替代品用于水产动物养殖中。

技术领域

本发明涉及一株肠球菌及其应用，尤其涉及一种对虾肠道肠球菌菌株及其筛选方法和应用。

背景技术

对虾养殖一直是我国水产养殖的一个重要支撑产业之一。但是，随着对虾养殖集约化程度的提高，导致对虾疾病频发，极大地制约了我市对虾养殖产业的发展。目前并无有效快速的方法防治对虾疾病，人们通常采用抗生素、化学合成药物等防治水产动物疾病。而长期、大量使用抗生素容易造成南美白对虾耐药性的产生，自身的免疫机能下降，而且容易造成病原菌的变异，产生许多耐药性菌株，为南美白对虾病害的防治埋下隐患。为了解决南美白对虾养殖过程中滥用抗生素造成的问题，寻求一种绿色、安全、无公害的防治病害的方法的研究成为热点，其中通过微生物的方法来提高对虾的免疫机能，达到病害防控的方法受到很多研究者的关注，成为解决南美白对虾病害以及安全性问题的有效途径。

乳酸菌是一类无芽孢、革兰氏染色呈阳性、可发酵碳水化合物（主要指葡萄糖）产大量乳酸的益生菌的总称。乳酸菌能够调节机体肠道正常菌群，保持微生态平衡，提高食物消化率，控制内毒素，抑制肠道内腐败菌的生长繁殖，从而对机体的生长发育有重要作用。它作为一种益生菌，不但可作为水产动物的饲料添加剂，而且可作为改善水质的微生物调控剂，应用于水产养殖中。但市场上的水产用乳酸菌制剂种类繁杂，有效成分难以证实，且大多都是从环境、土壤、泡菜和酸奶等中分离出来。这些乳酸菌制剂应用于水产养殖中，不一定能尽快成为优势菌并发挥作用。对虾水产养殖动物的养殖水体及其肠道本身是筛选对虾益生菌的重要资源。随着高通量测序技术的广泛应用，发现乳酸菌在多种水产养殖动物中为优势菌群，并可作为宿主健康的指示菌。因此，从对虾肠道分离和筛选出丰度较高的乳酸菌菌株，并应用于对虾养殖，对对虾高密度及健康生态养殖具有重大意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种对金黄色葡萄球菌和鳗弧菌具有抑制作用的对虾肠道肠球菌菌株及其筛选方法和应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种对虾肠道肠球菌菌株，该菌株为NBU1菌株，分类命名为肠球菌（Enterococcussp.），于2018年11月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.16735。

该菌株为革兰氏阳性菌，在MRS琼脂培养基上37℃培养24 h，菌落为乳白色，菌体卵圆形；该菌株在 MRS肉汤培养基中培养6 h时，OD₆₀₀值显著增加，9 h时达到稳定，且此时培养基pH值显著下降，该菌株可以生产酸性物质。

所述的MRS肉汤培养基配方为：蛋白胨 10.0 g，牛肉膏 10.0 g，酵母膏 5.0 g，柠檬酸氢二铵 2.0 g，葡萄糖 20.0 g，吐温80 1.0 mL，乙酸钠 5.0 g，磷酸氢二钾 2.0 g，硫酸镁 0.58 g，硫酸锰 0.25 g，蒸馏水 1000 mL，pH 6.8～7.0；所述的MRS琼脂培养基为在MRS肉汤培养基中加入MRS肉汤培养基质量18%的琼脂。

上述对虾肠道肠球菌菌株的筛选方法，包括以下步骤：

（1）乳酸菌的分离纯化