[发明专利]用于NK细胞转导的方法

权利要求书

1.一种用假型化逆转录病毒载体颗粒或其病毒样颗粒将生物材料转移至激活的NK细胞中的体外方法，其包括以下步骤：

a)NK细胞的激活，和

b)将所述假型化逆转录病毒颗粒或其病毒样颗粒添加至所述激活的NK细胞，

其中所述假型化逆转录病毒载体颗粒或其病毒样颗粒包含能够与造血细胞膜结合并融合的修饰的狒狒内源性逆转录病毒(BaEV)包膜糖蛋白，由此将生物材料转移至所述激活的NK细胞中。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在所述NK细胞的激活前，所述NK细胞从来自包含CX3CR1阳性和CX3CR1阴性NK细胞的样品针对CX3CR1阴性NK细胞进行富集。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述假型化逆转录病毒载体颗粒或其病毒样颗粒至少包含：

嵌合包膜糖蛋白，其包含狒狒内源性逆转录病毒(BaEV)包膜糖蛋白的跨膜和胞外结构域与鼠白血病病毒(MLV)包膜糖蛋白的胞质尾结构域的融合体或由其组成；或

修饰的BaEV包膜糖蛋白，其中所述BaEV包膜糖蛋白的胞质尾结构域缺乏融合抑制性R肽。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述NK细胞的所述激活通过对所述NK细胞添加至少一种细胞因子或饲养细胞或饲养细胞的膜颗粒或使用NK细胞激活试剂来实现。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述至少一种细胞因子是IL-2和/或IL-15。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述NK细胞的激活通过添加包含至少一种激活NK细胞的细胞因子和IL-1家族细胞因子的细胞因子组合来实现，由此导致NK细胞的短期激活。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述细胞因子的组合是IL2和/或IL-15和IL-1家族细胞因子。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述IL-1家族细胞因子是IL-18、IL-33或IL-1β。

9.根据权利要求1所述的方法，其中通过所述假型化逆转录病毒载体颗粒的所述NK细胞的转导效率为至少50％。

10.根据权利要求1所述的方法，其中如果所述NK细胞用所述逆转录病毒载体颗粒转导，所述生物材料是一个或多个核酸。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述逆转录病毒颗粒或其病毒样颗粒是慢病毒载体颗粒或其病毒样颗粒。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法在封闭系统中以自动化过程进行。

13.用于通过将生物材料体内转移至激活的NK细胞中治疗患有病症的人的组合物组合，其包含：

a)包含至少一种激活NK细胞的细胞因子的第一组合物，和

b)包含假型化逆转录病毒载体颗粒或其病毒样颗粒的组合物，其中所述假型化逆转录病毒载体颗粒或其病毒样颗粒包含能够与造血细胞膜结合并融合的修饰的狒狒内源性逆转录病毒(BaEV)包膜糖蛋白。

14.根据权利要求13所述的组合物组合，其中所述第一组合物包含细胞因子的组合，该组合包含至少一种激活NK细胞的细胞因子和IL-1家族细胞因子。