[发明专利]将样品中蛋白错误折叠疾病的蛋白聚集体定量的方法

说明书

本发明涉及将复杂样品中蛋白错误折叠疾病的蛋白聚集体定量的方法。公开了装置、试剂盒以及该装置和试剂盒的用途。

本发明涉及将样品中蛋白错误折叠疾病的蛋白聚集体定量的方法。

现有技术

从现有技术中已知色谱分离方法，例如尺寸排阻色谱法和基于超速离心法的分离方法，以使混合物中的蛋白彼此分离。

借助不同的离心技术，可以例如将具有β淀粉样蛋白的样品分级，以使得在不同级分中存在不同的β淀粉样蛋白物类。然后可以将它们通过ELISA、蛋白印迹、UV-VIS、质谱或SDS-PAGE进行分析，如例如由Funke等人已知(S. A. Funke, T. van Groen, I. Kadish,D. Bartnik, L. Nagel-Steger, O. Brener, T. Sehl, R. Batra-Safferling, C.Moriscot, G. Schoehn, A. H. C. Horn, A. Muller-Schiffmann, C. Korth, H.Sticht, D. Willbold. Oral Treatment with the D-Enantiomeric Peptide D3Improves the Pathology and Behavior of Alzheimer's Disease Transgenic Mice.ACS Chem. Neurosci. (2010), 1, 639–648)。

由Sehlin等人(Dag Sehlin , Hillevi Englund, Barbro Simu, MikaelKarlsson, Martin Ingelsson, Fredrik Nikolajeff, Lars Lannfelt, Frida EkholmPettersson. 2012. Large Aggregates Are the Major Soluble Aβ Species in ADBrain Fractionated with Density Gradient Ultracentrifugation. Plos one, 第7卷, e32014)已知，大的聚集体是通过密度梯度离心分级的阿尔茨海默氏痴呆的脑中β淀粉样蛋白物类的重要来源。对于定量，给出了一种Elisa方法。

由Ward等人(Robin V. Ward, Kevin H. Jennings, Robert Jepras, WilliamNeville, Davina E. Owen, Julie Hawkins, Gary Christie, John B. Davis, AshleyGeorge, Eric H. Karran and David R. Howlett. 2000. Fractionation andcharacterization of oligomeric, protofibrillar and fibrillar forms of β-amyloid peptide. Biochem. J. 348, 137-144)已知，在密度梯度离心后使用具有单克隆抗体mAb158的免疫测定以将β淀粉样蛋白聚集体定量。

在所用Elisa方法中公开的抗体的缺点是无法对来自复杂样品和混合物的β淀粉样蛋白进行高度灵敏定量。所提及的文献对此仅给出了最多微摩尔范围的β淀粉样蛋白的检测。因此，这些方法不灵敏。即使最灵敏的Elisa方法也只检测最多约100皮摩尔浓度的蛋白。从今天的角度来看，这看起来不足以也测试用于治疗阿尔茨海默氏痴呆的潜在活性成分在其效能方面的低效果。

发明目的

本发明的目的是提供用于将复杂样品或样品混合物中各蛋白聚集体定量的高度灵敏方法和装置，并说明该方法的其它应用。

目的的实现

所述目的通过根据主权利要求的方法以及附加权利要求来实现。对此的有利实施方式各自从引用它们的专利权利要求中得出。