[发明专利]使用阳离子交换色谱法分离三轻链抗体

说明书

本发明提供将三轻链(H2L3)抗体(例如抗CD123 H2L3抗体)或其抗原结合片段从包含H2L3抗体或其抗原结合片段和双轻链(H2L2)抗体(例如抗CD123 H2L2)或其抗原结合片段的抗体组合物中分离的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年9月22日提交的美国临时申请第62/562,188号的优先权，所述临时申请通过引用并入本文。

以电子方式提交的序列表的引用

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技术领域

本发明领域大体上涉及将三轻链(H2L3)抗体(例如抗CD123H2L3抗体)或其抗原结合片段从包含H2L3抗体或其抗原结合片段和双轻链(H2L2)抗体(例如抗CD123 H2L2)或其抗原结合片段的抗体组合物中分离的方法。

背景技术

用反应性半胱氨酸残基工程改造的重组抗体，即，“半胱氨酸工程改造抗体”可与相关药物共价结合以产生靶向治疗剂。研究显示，被稳定转染以表达这些半胱氨酸工程改造抗体的哺乳动物细胞也分泌被称为三轻链(H2L3)抗体的高分子量物质(Gomez等,Biotechnol Bioeng.105(4):748-60(2010))。H2L3半胱氨酸修饰抗体是额外轻链与H2L2半胱氨酸修饰抗体上的工程改造半胱氨酸残基之一之间的二硫键形成的产物。细胞培养物中的H2L3半胱氨酸修饰抗体的水平与细胞系和培养条件有关。尽管可调节细胞培养条件以将H2L3形成最小化(例如，通过在细胞培养期间采用温度变化)，但影响在很大程度上取决于细胞系(Gomez等,Biotechnol Prof.26(5):1438-45(2010))。

由于与单体物质的相似性，在单克隆H2L2半胱氨酸修饰抗体的下游纯化期间分离H2L3抗体成为一个挑战。在一项特定研究中，在非半胱氨酸工程改造的单克隆抗体的纯化时发现疏水性相互作用色谱法(HIC)使H2L3水平从约3％降到0.5％(Wollacott等,mAbs 5(6):925-935(2013))。在同一研究中，使用阳离子交换色谱法来试图去除H2L3抗体。然而，即使在修改的条件下，这种方法也不足以将所有测试细胞系中的H2L3百分比都降到小于1％。作者推断阳离子交换色谱法中的静电效应的强度不足以去除H2L3抗体。因此，为了获得最一致的抗体产物(例如，对于治疗抗体和含有所述抗体的免疫结合物)，需要在抗体纯化期间更有效地分离H2L3物质。

发明内容

本发明涉及开发用于分离三轻链(H2L3)抗体与双轻链(H2L2)抗体的有效纯化策略。所述方法利用以下事实：阳离子交换树脂主要基于电荷来分离蛋白质。如本文中所提供，在树脂的pH低于相关抗体的pH(例如3.8至6.5)时，所有抗体物质(包括H2L3及H2L2)都结合于阳离子交换树脂。当使用具有高pH和/或低盐浓度的洗脱组合物从阳离子交换树脂洗脱抗体时，H2L3物质不仅洗脱在H2L2物质的主峰洗脱之后的晚期洗脱份中，而且洗脱在含有所需H2L2物质的早期洗脱份中。然而，如本文中所说明，通过使用较低pH和较高盐浓度对阳离子交换树脂进行优化可使大部分或所有的H2L3物质洗脱在H2L2物质的主峰洗脱之后的晚期洗脱份中。使用优化POROS^TMXS强阳离子交换色谱法，抗体组合物中的H2L3抗体的量可以从11％降到小于1％，并且这种降低水平可在各种细胞系中再现。

在一些实施方案中，将H2L3抗体或其抗原结合片段从包含H2L3抗体或其抗原结合片段和H2L2抗体或其抗原结合片段的抗体组合物中分离的方法包括：(i)将所述抗体组合物施加到阳离子交换树脂，使得H2L3抗体或其抗原结合片段和H2L2抗体或其抗原结合片段结合于所述树脂；(ii)将pH为约3.8至约5.0的洗脱组合物施加到所述阳离子交换树脂；以及(iii)收集从所述树脂洗脱的H2L2组合物。