[发明专利]原位系列稀释方法

说明书

本文描述了通过原位系列稀释确定样品中分析物浓度的方法。

背景技术

在血库中，当在孕妇中检测到能够引起新生儿或胎儿的溶血性疾病的具 有临床意义的抗体时，通过进行抗体滴定来确定抗体滴度(或半定量浓度) 。在整个怀孕期间，都要重复母体的抗体滴度以确定抗体的滴度或浓度是否 升高。抗体滴度增加三倍或更多倍稀释被认为具有临床意义，并表明胎儿红 细胞(RBC)具有相应抗体的抗原。一旦滴度达到临界阈值，并且胎儿至少 在胎龄18周时，将进行其他研究，例如超声、多普勒超声检查、羊膜穿刺或 心脏穿刺。这些方法可监测胎儿的贫血水平，并指出需要进行宫内输血或其 他干预措施。

在分离多种抗体，抗体鉴定以及在单采血液供体血小板单位或要跨过 ABO边界移植的器官上进行ABO异血凝素滴度测定中，也需要在临床上进 行抗体滴定。也可以进行抗体滴定用于以下目的：(i)评估红细胞试剂的抗 原位点密度，(ii)评估新抗血清的特性或将新批次与以前的抗血清进行比 较，(iii)研究所谓的高滴度低亲合力(HTLA)抗体(例如，已知属于 Knops血型系统的抗体)，(iv)确定自身抗体在温暖抗体免疫溶血性贫血(WAIHA)中的相对特异性，(v)对来自可溶性血型物质分泌者的唾液进 行研究，(vi)在无法获得试剂或无法成功从细胞中去除IgG时，确定直接抗 球蛋白测试(DAT)阳性细胞的抗原状态，以及(vii)确定冷自身抗体的滴 度、特异性和热幅值，例如抗I。

通常通过对患者血浆进行连续两倍的稀释，然后与具有相应抗原的选定 红细胞(RBC)进行反应强度分级来对抗体进行滴定。滴度结果报告为血浆 最高稀释度的倒数，表明宏观凝集。患者血浆或血清的稀释应在分开的样品 管中进行，而不是直接在免疫诊断测试设备中进行，以防止样品被测试设备 中的试剂污染。

发明内容

本文描述了通过原位系列稀释确定样品中分析物浓度的方法。该方法包 括但不限于确定样品中抗体的滴度，确定抗原浓度和产生校准曲线。所公开 的方法可用于免疫诊断测试。已经发现了将样品原位或直接在测试装置(例 如凝胶测试卡)中而不是在分开的试管中稀释的方法。令人惊讶的是，在测 试装置中进行样品稀释时，保留了孵育室和反应室之间的气隙，并且在测试 装置中进行稀释时，样品没有被测试装置中的试剂污染。

在一个实施方案中，提供了一种通过原位系列稀释确定样品中分析物浓 度的方法。在该方法中，提供了一种免疫诊断测试卡，其包括支撑多个垂直 放置的微管的基本平坦的支撑件。测试卡中的每个微管都有用于接收样品的 孵育室和包含分离基质的反应室。将稀释剂添加到至少一个孵育室中。–将样 品直接系列稀释到其中具有稀释剂的每个孵育室中。将能够与分析物复合以 形成试剂-分析物复合物的试剂加入其中具有稀释剂和/或样品的每个孵育室中 。样品和试剂的混合物通过重力和/或离心作用使其沉降。通过确定样品的最 高稀释度来确定分析物的浓度，在该最高稀释度下在分离基质之上或之内检 测到试剂-分析物复合物。

在另一个实施方案中，通过原位系列稀释确定样品中分析物浓度的方法 包括提供免疫诊断测试卡，其包括支撑多个垂直放置的微管的基本平坦的支 撑件。每个微管具有用于接收样品的孵育室和包括分离基质和能够与分析物 复合以形成试剂-分析物复合物的试剂的反应室。将稀释剂添加到至少一个孵 育室中。将样品直接系列稀释到其中具有稀释剂的每个孵育室中。通过重力 和/或离心使测试卡发生沉淀。通过确定样品的最高稀释度来确定分析物的浓 度，在该最高稀释度下在分离基质之上或之内检测到试剂-分析物复合物。

附图说明

图1是可以在根据本发明的实施方案的方法中使用的免疫诊断测试卡的 正视图。

图2A–2B显示了如实施例1中所述的抗-D滴定实验的结果(抗-D血浆 预稀释500倍)。图2A是使用参比方法的测试卡结果的图像。图2B是使用 测试卡方法中的稀释的测试卡结果的图像。