[发明专利](1→3)-β-D-葡聚糖作为活性霉菌的量度

说明书

描述了电动装置和方法，目的是从介电流体介质收集可测定试剂。可通过在高压电极处产生等离子体和随后以电压梯度输送带电粒子来诱导电动流。活跃生长的霉菌将碳水化合物细胞壁成分(1→3)‑β‑D‑葡聚糖释放到空气中。本发明认识到空气传播部分是影响呼吸系统健康的部分，并选择性检验可溶于水性介质的游离形式。优选通过所述电动推进方法收集要分析的样品，但可应用任何空气采样方法，例如过滤、冲击器或撞击。

发明背景。

发明领域

本发明涉及在介电介质中可测定试剂的收集和采样。这包括但不限于对于可通过霉菌或霉菌孢子细胞壁成分的生物特异性测定来确定存在或不存在的药剂的空气采样。该领域包括对生物试剂的空气采样，引导到用于测定装置的收集工具，和在其上沉积。试剂特异性测定可包括基于蛋白水解途径的免疫测定或生色测定。测定可包括但不限于比色、荧光、浊度、电化学或伏安法的检测手段。

现有技术描述

(1→3)-β-d-葡聚糖，象过敏原一样(1-3)存在于孢子中，但通过萌发和生长真菌而以不易用显微镜识别为孢子的颗粒形式释放到空气中。因此，虽然(1→3)-β-d-葡聚糖本身不是过敏原，但两者很可能在空气中缔合。在花粉中也发现了(1→3)-β-d-葡聚糖(4)。

结构：

(1→3)-β-D-葡聚糖是大多数真菌、某些细菌、大多数高等植物和许多低等植物的非过敏原水不溶性结构细胞壁成分。葡聚糖最多可占真菌细胞壁干重的60%，其中大部分为(1→3)-β-D-葡聚糖(Klis, 1994)。它们由具有可变分子量和支化度的葡萄糖聚合物组成，即三股螺旋、单股螺旋或无规卷曲结构(Williams, 1997)。在真菌细胞壁中，(1→3)-β-D-葡聚糖与蛋白质、脂质和碳水化合物(如甘露聚糖和壳多糖)相连，并且它们包含(1→3)-b-葡聚糖侧支，该侧支可与相邻的(1→3)-β-D-葡聚糖聚合物连接。

与症状的关系：

空气中的水平与真菌量和症状的严重程度相关。由于从真菌释放的过敏原的贡献，这不是因果关系(5)。B-葡聚糖与50%患有预先存在呼吸系统病症的儿童的呼吸峰值流量变异性(PFV)相关(6)。

Douwes综述了与B-葡聚糖和呼吸系统健康有关的文献(7)。他们得出结论，综述的研究表明在(1→3)-β-D-葡聚糖暴露、气道炎症和症状之间存在某种关联。无法确定与暴露相关的可能潜在炎症机制。包括了使用实验性暴露的种群研究以及动物和人类研究。

测定：

在文献中已使用了三种测定：抑制免疫测定(8)、夹心单克隆免疫测定(9)和鲎变形细胞测定。后者由Associates of Cape Cod商业化。Brooks等人(10)对这3种方法作了实验室间比较。用不同方法得到的结果通常显著相关，因此在相对意义上是可比的，但在实验室和测定之间结果的直接比较是不合适的。

提取：

大多数β-(1,3)-葡聚糖在环境温度为水不溶性，并且两种提取方法为碱提取(通常涡旋，然后在0.3N NaOH中摇动1hr)和热水提取(通常在PBS中的0.05%Tween 20，颠倒旋转，高压釜60min涡旋)。碱提取已用于基于鲎变形细胞的方法，热提取则用于基于EIA的方法。所用的提取方法综述于(10)。对来自滤器的孢子进行测定(11)包括用0.15N NaOH处理。接着用NaOH当量浓度两倍的等体积tris-Cl中和。并非所有文章都提到中和步骤。在花粉出版物(4)中未提及提取。

Madsen等人描述了用NaOH的提取的优化(12)，并综述了一些使用或不使用或未提及提取的工作。在这一或其它工作中没有进行不用提取的对照。经常声明需要提取来溶解(1→3)-β-D-葡聚糖。

尺寸范围：