[发明专利]用于聚糖分析的工具

权利要求书

1.一种组合物，所述组合物包含第一唾液酸酶，所述第一唾液酸酶独立地选自：

(a)包含以下或由以下组成的多肽：SEQ ID NO:2氨基酸序列；

(b)包含以下或由以下组成的多肽：与SEQ ID NO:2氨基酸序列至少85％一致的氨基酸序列；或

(c)包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成的多肽：所述氨基酸序列为SEQ IDNO:2序列的片段或与SEQ ID NO:2氨基酸序列85％一致的氨基酸的片段；

任选地，其中所述第一唾液酸酶在N末端包括另外的甲硫氨酸和/或在C末端包括组氨酸标签，所述标签可以通过接头与C末端连接。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，还包含第二唾液酸酶，所述第二唾液酸酶独立地选自：

(d)包含以下或由以下组成的多肽：SEQ ID NO:5氨基酸序列；

(e)包含以下或由以下组成的多肽：与SEQ ID NO:5氨基酸序列至少85％一致的氨基酸序列；或

(f)包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成的多肽：所述氨基酸序列为SEQ IDNO:5序列的片段或与SEQ ID NO:5氨基酸序列85％一致的氨基酸的片段。

任选地，其中所述第二唾液酸酶在N末端包括另外的甲硫氨酸和/或在C末端包括组氨酸标签，该标签可以通过接头与C末端连接。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物能够水解糖蛋白中的90％的唾液酸键，所述糖蛋白优选为天然的非变性状态下的糖蛋白。

4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含由SEQ IDNO:3氨基酸序列组成的唾液酸酶和由SEQ ID NO:6氨基酸序列组成的唾液酸酶，优选比例为1:1。

5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述第一唾液酸酶和/或所述第二唾液酸酶以高度纯化或分离的形式存在；和/或其中所述组合物中不多于两种多肽是自嗜粘蛋白艾克曼菌获得的唾液酸酶。

6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物另外包含糖苷酶和/或蛋白酶，所述糖苷酶和/或蛋白酶任选地以高度纯化或分离的形式存在。

7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述糖苷酶是选自以下的O-糖苷酶：

a.包含以下或由以下组成的多肽：SEQ ID NO:9氨基酸序列；

b.包含以下或由以下组成的多肽：与SEQ ID NO:9氨基酸序列至少85％一致的氨基酸序列；

c.包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成的多肽：所述氨基酸序列为SEQ IDNO:9序列的片段或与SEQ ID NO:9序列85％一致的序列的片段；或

d.来自粪肠球菌的O-糖苷酶，任选地是具有Uniprot条目B5UB72版本22的氨基酸序列的多肽；

任选地，其中所述糖苷酶由SEQ ID NO:10氨基酸序列组成。

8.根据权利要求6或7所述的组合物，其特征在于，所述蛋白酶是选自以下的O-糖蛋白特异性内切蛋白酶：

a.包含以下或由以下组成的多肽：SEQ ID NO:11氨基酸序列；

b.包含以下或由以下组成的多肽：与SEQ ID NO:11氨基酸序列至少85％一致的氨基酸序列；或

c.包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成的多肽：所述氨基酸序列为SEQ IDNO:11序列的片段或与SEQ ID NO:11氨基酸序列85％一致的序列的片段；

任选地，其中所述蛋白酶由SEQ ID NO:12氨基酸序列组成。

9.一种修饰糖蛋白的方法，所述方法包括使包含所述糖蛋白的样品与根据前述权利要求中任一项所述的组合物接触，任选地，其中对所得产物进行分析。