[发明专利]研究诸如核酸之类的分子的方法

权利要求书

1.一种操控不溶混的载体介质中的反应介质的微滴的方法，其中，为了实现化学转化的目的，目标分子被结合到固体支持物，其特征在于以下步骤：(a)在引起微滴和固体支持物结合的条件下使微滴与固体支持物接触；(b)让所述反应介质与所述目标分子反应和(c)之后施加力，以诱导所述反应介质从所述固体支持物脱离并在载体流体中重新形成微滴。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应介质是用于转化核酸分析物的介质，并且所述目标分子包括多核苷酸。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，核苷酸被从分析物中释放出来，并在微滴中被从固体支持物附近带走。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，使多个微滴顺序地与分析物接触，每个微滴都能够带走核苷酸。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述化学转化用于确定核酸分析物的序列，并且所述方法的特征在于包括以下步骤：

·使不混溶的载体介质中的包括消化介质的反应介质的微滴的流在路径中逐一接触目标分子，所述目标分子包括与固体支持物结合的核酸分析物，所述固体支持物包括颗粒，从而使分析物逐步被消化成其组成核苷酸；

·从分析物周围移除微滴，其中所述微滴中的至少一些微滴包含单个核苷酸；

·进一步将微滴沿路径运送到检测区，和

·在检测区识别微滴中的单体单元，并由此推断所述分析物分子的序列。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述消化介质包含聚合酶和辅因子，所述辅因子使所述聚合酶从所述分析物分子逐个地释放核苷酸。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述辅助因子是多磷酸根阴离子或其类似物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述多磷酸盐根是焦磷酸根。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述消化介质包含核酸外切酶，并且由此释放的核苷酸单磷酸被进一步用激酶处理以将其转化为核苷酸三磷酸。

10.根据权利要求5至9中任一项所述的方法，其特征在于，在聚合酶的存在下，使所得的核苷酸与包含荧光探针的寡核苷酸捕获系统反应，所述荧光探针在其未使用状态下是不发出荧光的，并且所述荧光探针对至少一种所述分析物的特征核苷酸类型具有选择性，导致荧光团到可检测状态的释放，并且其中，使用第一电磁辐射的入射源和光电检测器检测每个微滴中释放的荧光团产生的荧光。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，荧光团的释放是核酸内切酶和/或核酸外切酶和可选的连接酶的作用的结果，这种作用通过被检测的核苷酸的捕获被催化。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其特征在于，通过液滴汇聚或通过直接注射将寡核苷酸捕获系统引入到所述颗粒下游的微滴中。

13.根据权利要求10至12中任一项所述的方法，其特征在于，在与所述寡核苷酸捕获系统反应之前，将所述消化介质进一步用焦磷酸酶处理。

14.根据权利要求5至13中任一项所述的方法，其特征在于，使所述微滴在表面上移动，所述表面被化学改性以具有可润湿性水平局部增加的区域，并且其中可润湿性的这种增加用于调节微滴流体在目标分子周围的润湿。

15.根据权利要求5至14中任一项所述的方法，其特征在于，电润湿或以光学方式调节的电润湿效应被用于局部地改变所述颗粒周围的表面区域的可润湿性。

16.根据权利要求5至15中任一项所述的方法，其特征在于，在第三步中使用电润湿或以光学方式调节的电润湿来运输所述微滴。