[发明专利]移除未分化的万能性干细胞的方法

说明书

本发明是有关一种移除未分化的胚胎干细胞的方法。具体而言，本发明是有关一种利用强心苷类(CGs)移除未分化的胚胎干细胞的方法。本发明亦有关一种制备分化细胞的方法，其中未分化的胚胎干细胞予以移除，以及有关一种利用此类分化细胞进行细胞疗法的方法。

相关申请

本申请是依据35 U.S.C.§119，主张于2017年6月7日申请的美国暂时专利申请号62/516,437的权益，其揭示内容在此并入本申请以作为参考数据。

技术领域

本发明是有关一种移除未分化的万能性干细胞的方法。具体而言，本发明是有关一种利用强心苷类(CGs)移除致癌的未分化万能性干细胞的方法。本发明亦有关一种制备分化细胞的方法，其中未分化的万能性干细胞予以移除，以及有关一种利用此类分化细胞进行细胞疗法的方法。

背景技术

人类胚胎干细胞(hESCs)与诱导性万能干细胞(iPSCs)为具有独特的自我更新(几乎无限复制的能力)与万能性(除了胎盘细胞以外，能分化成人体所有细胞类型)性质的人类万能性干细胞(hPSCs)。这些能力使得hPSCs有望用于再生疗法¹。然而，在将hPSCs应用于细胞疗法之前，仍有实质性的挑战等待克服。hPSCs的一个重要安全问题在于其致肿瘤风险，是因为这些细胞在异位点(ectopic sites)进行体内注射后可形成畸胎瘤^2,3。存在于数百万分化细胞中的数千个未分化的hPSCs足以在小鼠模型中诱导畸胎瘤⁴。因此，在以hPSC衍生细胞进行临床应用之前，移除所有或大多数具有畸胎瘤可能性的残留未分化hPSCs至关重要。

有数种策略可选择性地移除hPSCs。这些方法包括使用细胞毒性抗体^5,6、特异性抗体细胞分选^7-9、遗传操作^10-12、及药理学方法^13-16。然而，每一方法都有一定的缺点，如高成本(细胞毒性抗体与特异性抗体细胞分选)、不同批次间的差异(细胞毒性抗体与特异性抗体细胞分选)^17,18、非特异性结合(细胞毒性抗体)^18-20、毒性基因的遗传操作与稳定整入的需求(遗传操作)、及耗时的程序(遗传操作、特异性抗体细胞分选、及细胞毒性抗体)。尽管许多研究试图预防或阻止留下的hPSCs形成畸胎瘤，但仍有待开发出消除畸胎瘤形成的临床适用策略^2,21。

相反地，小分子方法具有以下数个优势：这些方法稳健、有效、快速、简单、及便宜，且不需要将基因插入细胞中。已经显示特定小分子可抑制hPSCs中的畸胎瘤形成。硬脂酰辅酶A去饱和酶抑制剂PluriSin#1可防止畸胎瘤形成¹⁵。然而，硬脂酰辅酶A去饱和酶为单饱和脂肪酸生物合成中的关键酵素，且为hPSC存活所必需¹⁵。N-芐基壬酰胺JC011通过PERK/AT4/DDIT3途径诱导ER应激(stress)²²。生存素的化学抑制剂，如槲皮素(quercetin)与YM155，可诱导选择性细胞死亡，且有效抑制畸胎瘤形成¹⁴。然而，这些药物皆未取得FDA明确定义或许可。