[发明专利]双分化或多分化类器官

权利要求书

1.产生具有至少两种组织类型的双分化或多分化组织的体外方法，其包括以下步骤：提供发育至感兴趣的分化阶段的第一组织；提供发育至与所述第一组织的感兴趣的分化阶段不同的感兴趣的分化阶段的第二组织；将所述第一和第二组织放置在足以通过生长融合的接近处；允许所述第一和第二组织生长并彼此融合；从而产生包含具有不同分化阶段的所述第一和第二组织的双分化或多分化组织；优选地，其中所述第一和/或第二组织，特别是两者，衍生自多能干细胞，特别是诱导多能干细胞的体外培养物。

2.权利要求1的方法，其包括与将所述第二组织发育至不同的感兴趣的分化阶段分开将所述第一组织发育至感兴趣的分化阶段。

3.权利要求1或2的方法，其中至少所述第一和/或第二组织包含神经元组织，优选地包含神经祖细胞和神经元。

4.权利要求3的方法，其中所述第一组织的分化阶段包含腹侧前脑祖组织或吻腹侧(rostro-ventral)前脑组织。

5.权利要求3或4的方法，其中所述第二组织的分化阶段包含背侧前脑组织或没有分化为腹侧或背侧前脑的神经外胚层。

6.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述将所述第一和第二组织放置在足以通过生长融合的接近处并且允许所述第一和第二组织生长并彼此融合的步骤在悬浮培养中进行。

7.权利要求1至6中任一项的方法，其中将所述双分化或多分化组织分化以形成神经板。

8.权利要求1至7中任一项的方法，其中将所述第一和第二组织培养至至少100μm，优选地至少150μm，特别优选地至少200μm的大小。

9.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述第一和/或第二组织表达可检测标志物，所述可检测标志物是来自所述第一和第二组织的组的另一者不表达的。

10.通过权利要求1至9中任一项的方法可获得的双分化或多分化组织。

11.具有不同分化阶段的至少两种组织类型的双分化或多分化组织，其中所述组织类型的至少一种包含腹侧神经元组织，并且至少另一种组织类型是基本上非腹侧的，但含有来自所述腹侧神经元组织的迁移细胞，该迁移细胞占所述基本上非腹侧组织的细胞的不超过5％，并且所述双分化或多分化组织在其最长维度上具有100μm至10mm的大小。

12.权利要求11的双分化或多分化组织，其中所述组织类型的至少一种表达所述双分化或多分化组织的另一种组织类型不表达的可检测标志物，优选荧光标志物。

13.权利要求10至12中任一项的双分化或多分化组织，其为球状体的形式或组织切片的形式。

14.测试或筛选影响双分化或多分化组织的分化的候选化合物的方法，其包括使权利要求1至9中任一项的方法中的细胞或组织与所述候选化合物接触或者使权利要求10至13中任一项的组织与所述候选化合物接触，并且在培养物中维持所述接触的组织，并且与未接触所述候选化合物的所述组织相比观察到所述组织中的任何分化变化。

15.用于根据权利要求1至9中任一项提供组织培养物的试剂盒，其包含腹侧分化诱导剂和背侧分化诱导剂，优选WNT抑制剂和/或SSH增强剂作为腹侧分化诱导剂和优选SSH抑制剂作为背侧分化诱导剂。