[发明专利]用于分析物测定的通用预处理试剂

说明书

本发明涉及用于从样品释放分析物的体外方法，其包括使所述样品与(i)离液剂、(ii)有机溶剂、(iii)去污剂和(iv)至少一种提供碳酸氢根离子的试剂接触。本发明进一步涉及用于从样品释放分析物的释放剂，其包含前述化合物。此外，本发明涉及与本发明的方法和释放剂相关的用途、试剂盒、方法和设备。

本发明涉及用于从样品释放分析物的体外方法，其包括使所述样品与(i)离液剂、(ii)有机溶剂、(iii)去污剂和(iv)至少一种提供碳酸氢根离子的试剂接触。本发明进一步涉及用于从样品释放分析物的释放剂，其包含前述化合物。此外，本发明涉及与本发明的方法和释放剂相关的用途、试剂盒、方法和设备。

体外诊断(IVD)方法通常需要在进行实际分析之前进行样品制备步骤。样品制备可意味着几种功能，如从样品基质的分析物释放，在分析物被捕获在红细胞内(例如免疫抑制药物)的情况下的溶血，以及低丰度分析物的可能分析物富集。样品制备步骤的另一种重要功能是除去样品基质以避免干扰；尤其是血液和血液来源的样品由蛋白(白蛋白、免疫球蛋白)和其他生物分子的高度浓缩且复杂的混合物组成，其可以导致下游分析中的问题，例如，色谱柱的阻塞或堵塞，降低它们的寿命(Furey等人 (2013) Talanta 115:104)，来自低丰度分析物的MS信号的“淹没”或抑制等。

质谱(MS)，尤其是液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)，已成为体外诊断中分析物定量的选择方法。特别是在测定具有相似结构的代谢物的小分子的情况下，MS的特异性和准确性对于生成可靠结果已变得至关重要。此类小分子的实例是维生素如25-羟基-维生素D3，类固醇如睾酮和免疫抑制药物如环孢菌素A和依维莫司。从血清或血浆样品测定25-羟基-维生素D3和睾酮。在免疫抑制药物的情况下，推荐的基质是全血，因为这些分析物与红细胞高度结合(Al-Jenoobi, FI (2016), Austin Chromatography 3:1039; Sallustio, BC(2010), Bioanalysis 2:1141)，因此需要在其定量之前的溶血步骤。对于25-羟基-维生素D3、睾酮、环孢菌素A和依维莫司，还已知这些分析物与样品中的基质蛋白结合并需要在定量前从基质蛋白释放：例如，在血液中的环孢菌素A中(Personalized Immunosuppressionin transplantation: role of biomarker monitoring and therapeutic drugmonitoring, Oellerich  DasGupta (2016):Elsevier, Amsterdam)，50-70%与红细胞结合，以及在血浆中发现的环孢菌素A中，98%与脂蛋白结合，而仅2%被发现在血浆中是游离的。类似地，在血液中的依维莫司中(Oellerich  DasGupta, loc. cit.)，近似75%与红细胞结合，且在血浆中发现的依维莫司中，75%与血浆蛋白结合，而25%被发现在血浆中是游离的。25-羟基-维生素D3和睾酮实际上分别排他地与维生素D结合蛋白和性激素结合球蛋白结合(Package inserts for Elecsys Assay Vitamin D total (2014-11, V 5.0);Rommerts FFG (2004): Testosterone: an overview of biosynthesis, transport,metabolism and non-genomic actions; In: Nieschlag, E, Behre, HM (编):Testosterone action, deficiency, substitution, 第3版. Cambridge, CambridgeUniversity Press, 1–38.)。