[实用新型]一种定量分析CHO宿主细胞DNA残留试剂盒

说明书

本实用新型涉及一种定量分析CHO宿主细胞DNA残留试剂盒，包括盒盖、海绵垫和盒体，所述盒盖与所述盒体通过铰链相连；所述盒体设有容纳腔，所述海绵垫置于所述容纳腔内，所述海绵垫上设有容器孔，所述容器孔内分别放置有两个第一洗涤液试剂瓶、2×结合缓冲液试剂瓶、洗涤液试剂瓶、蛋白酶K试剂瓶、核酸助沉剂EP管、磁珠EP管、CHO DNA标准品EP管、DNA稀释液EP管、2×PCR终极混合液EP管、CHO引物/探针混合液EP管、阴性对照EP管、灭菌水EP管、参照染料EP管和参照染料II EP管；本实用新型检测灵敏度良好且不受DNA片段干扰，线性范围良好，扩增特异性良好不受其他物种DNA干扰。

技术领域

本实用新型涉及生物技术领域，具体涉及一种高灵敏度的定量分析CHO 宿主细胞DNA残留试剂盒。

背景技术

在现代的生产工艺中，依赖于重组蛋白载体来生产生物制剂已经成为主流技术，CHO细胞作为常用的宿主细胞系用于生产生物制剂，而蛋白产品中含有残留的宿主细胞DNA是潜在的安全隐患，因此蛋白制品中DNA残留的多少是生产所必须严格把控的。

目前，检测外源DNA残留量的方法有DNA杂交法和荧光染料法。DNA杂交法需要的条件相对简单，但该方法存在时间长，操作繁琐，稳定性、敏感性、特异性较差等缺点；荧光染料法是利用PicoGreen这种高灵敏度的双链DNA 荧光染料对DNA含量进行定量测定。该方法的检验灵敏度可达300pg/mL，但良好的线性范围在DNA 1.25～80ng/mL(R²≥0.99)，同时，该方法缺点为容易受到RNA、ssDNA、dsDNA的干扰，另一方面，针对生物制品成品中宿主细胞DNA残留量往往低于有效的线性范围DNA(1.25～80ng/mL)。

因此，目前尚存在生物制品成品中DNA残留无法准确定量的问题。

实用新型内容

为了解决现有技术存在的问题，本实用新型提供了一种定量分析CHO宿主细胞DNA残留试剂盒，包括通过铰链相连的盒盖和盒体，盒体内设有海绵垫，海绵垫设有容纳腔，容纳腔内分别放置装有洗涤液、2×结合缓冲液、蛋白酶K；核酸助沉剂、磁珠、CHO DNA标准品、DNA稀释液、2×PCR终极混合液、CHO引物/探针混合液、阴性对照、灭菌水、参照染料和参照染料II的试剂瓶和EP管，本实用新型检测灵敏度高，线性范围良好，扩增特异性良好。

本实用新型的目的是提供一种高灵敏度的定量分析CHO宿主细胞DNA 残留试剂盒，包括盒盖、海绵垫和盒体，所述盒盖与所述盒体通过铰链相连；所述盒体设有容纳腔，所述海绵垫置于所述容纳腔内，所述海绵垫上设有容器孔，所述容器孔内分别放置有第一试剂瓶、第二试剂瓶、第三试剂瓶和EP管；所述第一试剂瓶包括两个第一洗涤液试剂瓶；所述第二试剂瓶包括2×结合缓冲液试剂瓶；所述第三试剂瓶包括洗涤液试剂瓶和蛋白酶K试剂瓶；所述EP管包括核酸助沉剂EP管、磁珠EP管、CHO DNA标准品EP管、DNA稀释液EP 管、2×PCR终极混合液EP管、CHO引物/探针混合液EP管、阴性对照EP管、灭菌水EP管、参照染料EP管和参照染料II EP管。

优选地，所述第一试剂瓶包括两个装有100ml洗涤液试剂瓶；所述第二试剂瓶包括装有40ml 2×结合缓冲液试剂瓶；所述第三试剂瓶包括装有5ml洗涤液试剂瓶和装有5ml蛋白酶K试剂瓶；所述EP管包括装有100μl核酸助沉剂 EP管、装有1ml磁珠EP管、0.5ml CHODNA标准品EP管、0.54ml DNA稀释液EP管、0.75ml 2×PCR终极混合液EP管、0.3ml CHO引物/探针混合液EP 管、0.5ml阴性对照EP管、0.5ml灭菌水EP管、20μl参照染料EP管和20μl 参照染料II EP管。

本实用新型在分析CHO细胞核酸重复序列的基础上，选择了一系列高度重复序列作为定量分析基因，使用Taqman探针法qPCR技术将检测灵敏度大大提高2个数量级(5pg/mL)，检测上限提高了2个数量级(50000ng/mL)，良好的线性范围在DNA 5pg～50000ng/mL(R²≥0.99)。