[发明专利]糖化血红蛋白提取试剂盒及提取方法

说明书

本发明公开了一种糖化血红蛋白提取试剂盒及提取方法，涉及生物技术领域。该提取试剂盒由清洗液A、清洗液B、洗脱液和储存液组成，其中：所述清洗液A的成分如下：缓冲液PH7.0、氯化钠、氯化钾、叠氮钠；所述清洗液B的成分如下：HEPS Buffe、氯化锂、硫酸镁、TCEP；所述洗脱液的成分如下：硫酸铵、氯化铵、曲拉通、乙二醇；所述储存液的成分如下：甘油、TCEP、稳定剂、叠氮钠。本发明对操作设备要求低，且提取的糖化血红蛋白可以长期保存。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种糖化血红蛋白提取试剂盒及提取方法。

背景技术

正常人血液中血红蛋白共有三种形式：HbA，HbF，HbA2，一般成人红细胞中HbA是主要成分。通过使用层析法进行血红蛋白分离，可分离出三种含糖血红蛋白：HbAla、HbAlb和HbAlc，这三种糖化血红蛋白共同组成了糖化血红蛋白。糖化血红蛋白是人体血液中红细胞内的血红蛋白和血糖结合产生，当糖化血红蛋白值越高，表明血红蛋白和血糖结合越多，糖尿病病情愈发严重。人体内红细胞一般能够持续存在120天，糖化血红蛋白水平一般情况下反应了检测前120天平均血糖水平。

目前针对糖化血红蛋白提取方法主要是有非固定化胶条与聚丙烯酰胺等电聚焦的融合技术分离纯化糖化血红蛋白，离子交换层析分离提取糖化血红蛋白，自由流等电聚焦技术提取糖化血红蛋白等。但是上述三种技术对设备的要求高，并且提取的糖化血红蛋白回收后不可长时间保存，不利于科学研究。

发明内容

本发明提供一种对操作设备要求低，且提取的糖化血红蛋白可以长期保存的糖化血红蛋白提取试剂盒及提取方法。

为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：

本发明提供一种糖化血红蛋白提取试剂盒，由清洗液A、清洗液B、洗脱液和储存液组成，其中：

所述清洗液A的成分和含量如下：

所述清洗液B的成分和含量如下：

所述洗脱液的成分和含量如下：

所述储存液的成分和含量如下：

进一步的，所述清洗液A和清洗液B的最终PH值为6.95。进一步的，所述清洗液A的成分和含量如下：

进一步的，所述缓冲液为磷酸钠或磷酸钾。

进一步的，所述清洗液B的成分和含量如下：

本发明还提供一种糖化血红蛋白提取方法，采用权利要求1至5中任一所述的糖化血红蛋白提取试剂盒，所述提取方法包括：

步骤1：对采取的血液进行室温放置半小时；

步骤2：在采取的血浆中加入所述清洗液A进行37度处理，之后加入所述清洗液B，颠倒混匀进行离心弃上清，重复操作至上清无色，得到第一沉淀物，其中，所述血浆、清洗液A和清洗液B三者之间的体积比为：血浆：清洗液A：清洗液B＝1:2：3；

步骤3：在所述第一沉淀物中加入清洗液B进行混匀处理，之后进行离心弃上清，得到第二沉淀物，其中，所述第一沉淀物与清洗液之间的体积比为1：2；

步骤4：在所述第二沉淀物中加入所述洗脱液进行混匀处理，离心上清，得到第三沉淀物，其中，所述第二沉淀物与洗脱液的比例为1:3；