[发明专利]抗球虫饲料添加剂产品中绿原酸与咖啡酸含量的测定方法

说明书

本发明提供抗球虫饲料添加剂产品中绿原酸与咖啡酸含量的测定方法，包括：S1、向抗球虫饲料添加剂产品中加入甲醇或乙醇浸提，将提取液作为样品溶液；S2、向样品溶液中加入甲醇或乙醇、十二烷基硫酸钠、铁氰化钾和三氯化铁，于暗处放置一段时间，加入酸性物质终止反应；S3、用紫外分光光度计测定190～800nm处的吸光度值；S4、分别配制绿原酸、咖啡酸标准品溶液，按S2‑S3进行检测，绘制标准曲线；S5、根据样品溶液的检测结果，对照标准曲线，获得样品溶液中绿原酸与咖啡酸的浓度，计算出产品中绿原酸与咖啡酸的含量。利用本发明的紫外分光光度法测定爱绿爽产品中绿原酸与咖啡酸含量，操作简单、成本低、灵敏度高、稳定性好。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体地说，涉及抗球虫饲料添加剂产品中绿原酸与咖啡酸含量的测定方法。

背景技术

在禽类养殖中，球虫病是严重危害养殖业的疾病之一，该病的发生率极高，分布范围广，其病死率可达40％～80％。爱绿爽是北京爱绿生物科技有限公司生产的一种安全高效、无残留、不易产生耐药性的抗球虫饲料添加剂(参见ZL201410832060.X，发明名称：一种天然植物抗球虫饲料添加剂及其应用)。该饲料添加剂中，发挥抑杀球虫作用的主要为酚酸类成分，包括绿原酸、咖啡酸等，酚酸类物质可直接抑杀球虫子孢子、第一代及第二代裂殖体，还可激活和增加体内特异性蛋白酶类，发挥对虫体蛋白质的分解作用，抑制球虫的发育，降低卵囊排出率。为了明确产品中酚酸类成分的含量，作为品质控制指标，用于产品真伪鉴定，必须运用适当的检测手段来实现这一目的，且该手段应快速、准确，便于操作。

酸类物质的常规检测手段包括总酸滴定法(常用于酸度范围已知的无机酸类，利用氢离子浓度的差异标定总酸的含量)、高效液相色谱法(常用于定量检测某种单一酸类物质的测定，不限于无机或有机酸)等，该产品所含酸类物质主要为有机酸中的酚酸类，且含量范围未知，不适用于总酸滴定法；高效液相色谱法非常精确，但是操作要求严格，步骤相对复杂，耗时耗力，仪器成本高，虽可用于该产品的总酚酸常规测定，然而综合考虑到成本、操作难易度等因素，高效液相色谱法并非日常生产中进行产品质控的优选方法。

发明内容

本发明的目的是提供抗球虫饲料添加剂产品(特别是天然植物抗球虫饲料添加剂产品)中绿原酸与咖啡酸含量的测定方法。

本发明构思如下：利用紫外分光光度法测定爱绿爽产品(ZL201410832060.X)中总酚酸(绿原酸和咖啡酸)含量。紫外分光光度计法的原理为：酚类化合物在碱性条件中，当有氧化剂铁氰化钾存在时，酚类化合物中的酚羟基与三氯化铁中的铁离子呈现显色反应，生成蓝色络合物。根据络合物颜色深浅，通过紫外分光光度计在其相应波长下进行比色，能够迅速准确地测定产品中的总酚酸含量。

为了实现本发明目的，本发明提供的抗球虫饲料添加剂产品中绿原酸与咖啡酸含量的测定方法，包括以下步骤：

S1、向抗球虫饲料添加剂产品中加入甲醇或乙醇浸提，将提取液作为样品溶液；

S2、向样品溶液中加入适量甲醇或乙醇，然后加入十二烷基硫酸钠、铁氰化钾和三氯化铁，混匀，于暗处放置一段时间，向体系中加入酸性物质终止反应；

S3、用紫外分光光度计测定190～800nm(优选324nm)处的吸光度值；

S4、分别配制不同浓度梯度的绿原酸标准品溶液和咖啡酸标准品溶液，按照步骤S2-S3进行检测，根据标准品溶液的浓度及相应的吸光度值绘制标准曲线；

S5、根据样品溶液的检测结果，对照标准曲线，获得样品溶液中绿原酸与咖啡酸的浓度，从而计算出抗球虫饲料添加剂产品中绿原酸的含量；

其中，所述抗球虫饲料添加剂产品为天然植物抗球虫饲料添加剂产品(爱绿爽产品)。