[发明专利]鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法及其染色液和制备方法在审
| 申请号： | 201811630016.5 | 申请日： | 2018-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN109724956A | 公开（公告）日： | 2019-05-07 |
| 发明（设计）人： | 朱方容;黄深惠;黄旭华;李韬;王霞;蒋满贵;李标 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区蚕业技术推广总站 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 广西南宁公平知识产权代理有限公司 45104 | 代理人： | 杨立华 |
| 地址： | 530007 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 染色液 原虫 微粒子 孢子 鳞翅目昆虫 荧光显微镜 荧光染色 制备 检测 对鳞翅目昆虫 磷酸盐缓冲液 机械检验 特异性强 形状特征 异硫氰酸 标准物 孢子壳 染色 荧光 制片 检验 昆虫 观察 应用 | ||
1.一种鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液，其特征在于为含异硫氰酸的磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的pH值为7.8-9.0。
2.根据权利要求1所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液，其特征在于：所述异硫氰酸的浓度为0.1mg/mL-0.5mg/mL。
3.权利要求1所述鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液的制备方法，其特征在于：用pH值为7.8-9.0的磷酸盐缓冲液溶解异硫氰酸粉至浓度为0.1mg/mL-0.5mg/mL，然后用滤网过滤。
4.根据权利要求1所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液的制备方法，其特征在于：所述滤网的网眼为35-45μm。
5.一种鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于使用权利要求1所述染色液对样品进行荧光染色，然后在荧光显微镜下观察孢子。
6.根据权利要求5所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于包括以下步骤：染色液的制备、样本制备、染色和观察。
7.根据权利要求6所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于所述染色液的制备按以下操作进行：以异硫氰酸粉为荧光染色剂，用pH值为7.8-9.0的磷酸盐缓冲液溶解异硫氰酸粉至浓度为0.1mg/mL-0.5mg/mL，然后用滤网过滤。
8.根据权利要求6所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于所述样本制备按以下操作进行：用KOH或NaOH溶液研磨或稀释待检物，用滤网过滤，滤液作为待检液备用。
9.根据权利要求6所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于所述染色和观察按以下操作进行：染色液和待检液在离心管中混合，放置于黑暗处，室温下孵育约15-30分钟，3000转/min离心5-10min,弃掉上清液，摇匀；经过染色的待检液，滴在玻片制片，对照微粒子原虫孢子标准品用荧光显微镜观察检验。
10.根据权利要求6所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于：所述KOH或NaOH溶液的质量浓度为0.5％-1％，滤网的网眼为35-45μm，待检液与染色液的比例为4︰1至20︰1。
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