[发明专利]可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器及其制备法

权利要求书

1.一种可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器，其特征在于，以金电极作为检测界面，四面体连接双适配体通过金硫键结合在金电极表面，纳米探针通过适配体捕获细胞而连接到细胞传感界面。

2.根据权利要求1所述的一种可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器，其特征在于，四面体连接双适配体(AS1411-A和MUC1-A)通过金硫键结合在金电极表面。

3.根据权利要求1或2所述的一种可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器，其特征在于，适配体MUC1和AS1411的比例1∶1时最佳。

4.根据权利要求1所述的一种可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器，其特征在于，纳米探针集合新型金属有机框架PCN-224-Pt、辣根过氧化物酶、双适配体、血红素、G-四联体于一体。

5.一种可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器的制备法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)金电极的前处理：金电极首先用食人鱼洗液浸泡15分钟，然后置于打磨布上进行打磨，超声处理后，再用0.5M的硫酸活化直到信号稳定；

(2)四面体连接的适配体的固定：分别取10μM的四面体单链连接的适配体AS1411-A、四面体单链AS1411-B、AS1411-C和AS1411-D于四支PCR管中，各加入等体积1mM的三氯乙基磷酸酯，反应1h。上述溶液均混合于同一PCR管中，于95℃条件下反应10min，马上降温至4℃条件下反应10min，可得四面体连接的适配体AS1411三维结构。四面体连接的适配体MUC1三维结构用MUC1-A、MUC1-B、MUC1-C和MUC1-D同法可得。取10μL两种适配体溶液滴加到前处理过的金电极，于37℃条件下反应3h。两种适配体通过Au-S键自主装固定于金电极上，可高效、特异性地捕获人乳腺癌细胞MCF-7；

所述的AS1411三维结构的四面体单链连接的适配体AS1411-A的序列为：5’-ACA TTCCTA AGT CTG AAA CAT TAC AGC TTG CTA CAC GAG AAG AGC CGC CAT AGT ATT TTT TTTTTG GTG GTG GTG GTT GTG GTG GTG GTG G-3’；

所述的MUC1三维结构的的四面体单链连接的适配体MUC1-A的序列为：5’-ACA TTC CTAAGT CTG AAA CAT TAC AGC TTG CTA CAC GAG AAG AGC CGC CAT AGT ATT TTT TTT TTGCAG TTG ATC CTT TGG ATA CCC TGG-3’；

所述的AS1411三维结构和MUC1三维结构的四面体单链B的序列为：5’-HS-TAT CAC CAGGCA GTT GAC AGT GTA GCA AGC TGT AAT AGA TGC GAG GGT CCA ATA C-3’；

所述的AS1411三维结构和MUC1三维结构的四面体单链C的序列为：5’-HS-TCA ACT GCCTGG TGA TAA AAC GAC ACT ACG TGG GAA TCT ACT ATG GCG GCT CTT C-3’；

所述的AS1411三维结构和MUC1三维结构的四面体单链D的序列为：5’-HS-TTC AGA CTTAGG AAT GTG CTT CCC ACG TAG TGT CGT TTG TAT TGG ACC CTC GCA T-3’；

(3)多功能纳米探针的固定：随后将合成的DNA酶(G-四联体/血红素)-双适配体-PCN-224-Pt颗粒-辣根过氧化物酶纳米探针引入到不同细胞浓度的传感界面上，于37℃反应1小时。随后将电极置于含有3mM对苯二酚和1.5mM过氧化氢的PBS溶液中，反应5分钟，然后进行差示脉冲伏安法扫描；

所述的AS1411适配体的序列为：5’-HS-(CH₂)₆-TTTGGGTAGGGCGGGTTGGG-TTTTTT-GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3’；

所述的MUC1适配体的序列为：5’-HS-(CH₂)₆-TTTGGGTAGGGCGGGTTGGG-TTTTTT-GCAGTTGATCCTTTGGATACCCTGG-3’；

(4)金电极的重复修饰：实验结束后，外加电压-1.7～-0.9V破坏Au-S键并重新生成裸的金电极表面，用于重新、反复修饰。