[发明专利]人和肽素快速定量检测方法与试剂盒

权利要求书

1.一种人和肽素快速定量检测的试剂盒，其特征在于，包含有：人和肽素单克隆抗体，所述抗人和肽素单克隆抗体由以下方法制备得到：

以人和肽素抗原免疫小鼠；向免疫后的小鼠递送表达细胞因子的质粒；收集经质粒递送免疫的小鼠的脾细胞或淋巴结细胞，并将所述脾细胞或淋巴结细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合得到杂交瘤细胞，培养，分泌得抗人和肽素单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述人和肽素抗原为含有氨基酸序列SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的多肽；和/或

所述人和肽素抗原为偶联有大分子蛋白的人和肽素抗原，所述大分子蛋白为KLH、OVA、BSA中的至少一种；和/或

所述细胞因子包括mFlt3l、mGM-CSF和mCCL20。

3.根据权利要求1任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述高亲和力的抗人和肽素单克隆抗体与磁微粒偶联，作为捕获抗体。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含有检测抗体，所述检测抗体与所述捕获抗体识别人和肽素的不同表位。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述检测抗体为：碱性磷酸酶标记的人和肽素单克隆抗体、辣根过氧化酶标记的人和肽素单克隆抗体中的任一种。

6.根据权利要求1～5任一项所述的试剂盒，其特征在于，包含有：捕获抗体、检测抗体、人和肽素标准品和发光底物；

所述捕获抗体为：磁微粒包被的高亲和力的抗人和肽素单克隆抗体；

所述检测抗体为：酶标人和肽素单克隆抗体；所述发光底物经酶标人和肽素单克隆抗体上的酶催化后发光；

所述检测抗体与所述捕获抗体识别人和肽素的不同表位。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，使用时所述捕获抗体的稀释比例为1：(50～100)，所述检测抗体的稀释比例为1：(50～200)；和/或

所述酶标人和肽素单克隆抗体为碱性磷酸酶标记的人和肽素单克隆抗体，所述发光底物为AMPPD。

8.一种人和肽素快速定量检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将捕获抗体分别加入待测样品中，孵育；

加入检测抗体，形成夹心免疫复合物、检测；

检测梯度浓度的人和肽素标准品制备标准曲线；

根据标准曲线计算待测样品的浓度，即得；

所述捕获抗体为权利要求1所述高亲和力的抗人和肽素单克隆抗体与磁微粒偶联得到；所述检测抗体为酶标记的人和肽素抗体，与所述捕获抗体识别的人和肽素的表位不同。

9.根据权利要求7所述的人和肽素快速定量检测的方法，其特征在于，所述捕获抗体的稀释比例为1：(50～100)，所述检测抗体的稀释比例为1：(50～200)；和/或

所述孵育的时长为30～50min，pH值为8～9。

10.根据权利要求8或9所述的人和肽素快速定量检测的方法，其特征在于，所述检测为化学发光法，包括：

将所述夹心免疫复合物磁分离，洗涤去除多余的检测抗体，加入发光底物AMPPD，混匀，温育，测量发光值。