[发明专利]一株地衣芽孢杆菌及其在防治便秘上的应用

说明书

本发明公开了一株地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YHSH‑02及其在防治便秘上的应用，该菌种已在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO．15454，保藏日期为2018年3月15日。本发明不仅扩大了地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YHSH‑02的应用范围，提高了其应用价值，而且给便秘的防治带来了更好的效果。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及一株地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YHSH-02及其在防治便秘上的应用。

背景技术

便秘是指各种原因引起的排便困难、排便次数减少、或排便不尽感，可分为功能性便秘和继发便秘两类。便秘的发生可能与饮食中纤维素含量少、液体量摄入不足、遗传易感、胃肠运动、胃肠激素、环境影响、精神心理等多种因素有关。

现代先进技术大量运用于便秘这种常见疾病的研究加深了人们对于其发病原因发病机制的认识。西医对于便秘的诊断较为明确，治疗方法主要采用口服药物治疗，常用药物包括容积性泻剂、刺激性泻剂、渗透性泻剂、润滑性泻剂、促动力药物等。这些药物对于缓解便秘近期疗效令人满意，但是远期疗效相对较差。部分药物长期不合理使用容易导致不良反应，如葱酮类药物长期使用可致水、电解质失去和结肠功能障碍，还可造成患者对药物的依赖性;盐类泻药中的镁离子大约20%可被肠道吸收，肾功能障碍病人或中枢抑制的病人可能发生毒性反应。中医治疗功能性便秘具有中医的特色和优势，但是常用的中药（如大黄，番泻叶，芦荟等含有恩醌类的刺激性泻药），这些药物对于缓解便秘近期疗效令人满意，但是远期疗效相对较差。长期使用普遍疗效不佳，而且在治疗上忽视本虚标实这一基本病机，有的单纯祛邪，有的单纯补虚，效果不理想。近年来功能性便秘的治疗有了新的发展，出现了心理疗法、生物反馈治疗等方法，临床上颇有疗效，但这些只可作为药物治疗便秘的辅助手段。

近年来，对益生菌的研究和应用越来越广泛，在人类健康中起了非常重要的作用。地衣芽孢杆菌是一种产芽孢、兼性需氧的革兰氏阳性菌，具有抗逆性强、抑菌谱广、代谢产物丰富等特点，作为益生菌添加在饲料中，通过抑制病原菌粘附、生物夺氧、拮抗病原菌、分泌多种消化酶等，营造健康肠道环境，促进营养物质吸收利用，提高畜禽健康水平。也有应用在肠道腹泻上，但其还没有被应用到防治便秘上，本发明通过大量试验发现一株地衣芽孢杆菌，对防治便秘效果非常好的一株动物肠道分离菌。

发明内容

本发明的目的是提供一株地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YHSH-02及其在防治便秘上的应用，该菌种已在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO．15454，保藏日期为2018年3月15日。其中，地衣芽孢杆菌制剂的制备可以按以下步骤制备（也可以用其它方法制备）：

一、取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种50毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时。种子采用5%的接种量，接种至装液量为2LLB培养基的5L大三角瓶中， 37℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，活菌含量超过20亿/毫升，即可作为地衣芽孢杆菌液体菌种；

二、将步骤一培养的地衣芽孢杆菌液体菌种作为种子，接种至600L发酵培养基，接种量为10%，开搅拌120r/min，每分钟通气量液气比1：0.8，37℃培养24-36小时，待芽孢含量不低于150亿CFU/ml，即可结束发酵，无菌灌装得到成品地衣芽孢杆菌菌剂；或得到发酵液后加上糊精进行喷雾干燥，得到地衣芽孢杆菌粉剂，其粉剂芽孢含量不低于100亿CFU/g；