[发明专利]一种原发性膜性肾病诊断试剂盒

说明书

本发明涉及一种原发性膜性肾病诊断试剂盒，属于生物诊断技术领域。本发明提供了一种原发性膜性肾病诊断试剂盒及其制备方法、检测方法与应用，运用此含标记Pla2r抗原的试剂盒对人体血液样本进行检测，可以获得截断值(加解构剂的样品检测信号值与不加解构剂的样品检测信号值之间的比值)，此截断值可以辅助评估IMN患者的病情及监测治疗效果，为下一步准确治疗提供了有力依据，适于大规模推广应用。

技术领域

本发明涉及一种原发性膜性肾病诊断试剂盒，属于生物诊断技术领域。

背景技术

原发性膜性肾病(IMN)为最常见的肾病类型，约占整个肾病的15～20％；相对于其他的肾病，IMN的预后较差，接近50％的IMN最终发展为肾衰竭，且对于已经明确为IMN的患者，目前尚无有效的治疗措施；若能够在IMN症状尚未出现时，尽早地发现IMN发病风险，并及时采取预防措施，将显著降低IMN的发病率以及IMN的预后较差的情况。

现有的IMN诊断手段，主要依赖于肾脏穿刺后的病理诊断；而对于IMN的预后与治疗效果评估，则依赖于非特异的蛋白尿进行肾脏功能的评估；最为严重的是，目前临床上亟需合适的IMN预后评估产品。

自2009年Beck等发现磷脂酶a2受体(Pla2r)是IMN特异性的标志物以后，IMN的诊治进展迅猛，是近年来，肾病诊疗领域的热点之一。

Pla2r对于IMN的管理有三大作用：

(一)早发现：IMN属于自身免疫性疾病，即患者产生了针对自身肾小球细胞的免疫攻击，造成肾损伤；在临床症状出现之前，患者血清中已经出现了高浓度的Pla2r；通过及时的Pla2r抗体检测，发现阳性的患者，采用免疫阻断的方式，可显著降低IMN的发病率，或有限改善IMN发病后的预后情况。

(二)病情监测：对于确诊的IMN患者，其血清中Pla2r抗体浓度与病情的反复有高度的一致性。

(三)无创检测：传统的诊断技术，需依赖肾脏穿刺，因此无法用于高危人群的筛查；血清Pla2r抗体浓度变化，可以通过简单的抽血检验完成，这大幅提高了IMN患者的管理效率。

现有的原发性膜性肾病的检测方法，仅能适用于诊断与筛查，对病情预后，尤其是治疗效果的预测，无法进行判读。

为了解决存在的上述问题，急需提供一种针对病情预后和治疗效果能够作出预测、成本低、操作简便的诊断试剂盒。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种原发性膜性肾病诊断试剂盒，包括：

(1)用标记物标记的磷脂酶a2受体蛋白；

(2)固定有磷脂酶a2受体蛋白的检测载体；

(3)解构剂；所述解构剂包括尿素、盐酸胍、十二烷基苯磺酸钠、硫酸铵、乙二胺、乙二胺四乙酸钠或氯化钠。

在本发明的一种实施方式中，所述解构剂包括5～11mol/L的尿素溶液、0.5～1.5％的十二烷基苯磺酸钠溶液、1～6mol/L的盐酸胍溶液或3～8％的氯化钠溶液。

在本发明的一种实施方式中，所述的检测载体为生物载片、酶标板、层析膜、渗滤膜、蛋白质印迹膜、胶乳微球或磁性微球。

在本发明的一种实施方式中，所述的标记物为生物酶如HRP、具有荧光化合物如荧光蛋白或金属的标记物或具有化学发光化合物如三联吡啶钌化合物的标记物。

在本发明的一种实施方式中，所述的磷脂酶a2受体蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在本发明的一种实施方式中，试剂盒还包括稀释液、包被缓冲液、封闭液、洗涤液、固定液、显色液和/或终止液。