[发明专利]含油污水降解复合菌及其制备方法

说明书

本发明涉及一种含油污水降解复合菌。主要解决了现有生物菌剂处理含油污水主要针对单一指标有作用且对环境要求较高的问题。该含油污水降解复合菌，其组分及配比按体积比如下：雷氏普罗威登斯菌（Providencia rettferi）：摩根菌属摩根氏菌（Morganella morganii）：铜绿假单胞菌为1:1:1。其制备方法为：将三种菌株分别以LB培养基在37℃条件下培养48小时，将每株菌种的菌液与甘油混合，置于无菌离心管中，低温下保存，使用之前放至室温，在LB培养基活化，以菌落总数计数，以无菌生理盐水将每种菌株稀释至同一数量级，制成的菌悬液等比例充分混合，即为本发明的混合菌剂。该含油污水降解复合菌，能够同时降解油、COD，能够适应更恶劣的处理环境。

技术领域

本发明涉及油田污水处理生物制剂技术领域，尤其涉及一种含油污水降解复合菌及其制备方法。

背景技术

目前生物处理法普遍应用于生活污水处理，在含油污水处理上研究较多，但效果好的不多，含油污水的处理在国内还处于研究开发阶段，目前国内利用生物菌剂处理含油污水主要针对单一指标有作用，比如单独用于降解油，降解COD、降低黏度、降低悬浮物，目前用于降解含油的产品较多，但用于降解COD的产品较少，同时，已有生物菌剂产品处理含油污水对环境要求较高，碧沃生公司生产的生物菌剂处理含油污水要求环境条件pH在6.6-7.4，巴克曼公司生产的生物菌剂要求环境条件pH在7.5-8.0之间，普罗公司生产的生物菌剂处理含油污水需要额外添加解毒剂，才能达到预期效果。

发明内容

本发明在于克服背景技术中存在的现有生物菌剂处理含油污水主要针对单一指标有作用且对环境要求较高的问题，而提供一种含油污水降解复合菌及其制备方法。该含油污水降解复合菌，能够同时降解油，降解COD，能够适应更恶劣的处理环境，更耐盐，更耐碱。

本发明解决其问题可通过如下技术方案来达到：该含油污水降解复合菌，其组分及配比按体积比如下：雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettferi)：摩根菌属摩根氏菌(Morganella morganii)：铜绿假单胞菌为1:1:1。

本发明还提供了含油污水降解复合菌的制备方法，包括以下步骤：三种菌株分别以LB培养基在37℃条件下培养48小时，将每株菌种的菌液与60％的甘油按比例充分混合，置于1.5mL的无菌离心管中，在低温-20℃条件下保存，使用之前放至室温，在LB培养基，37℃，培养48小时条件下活化，以菌落总数计数，以无菌生理盐水将每种菌株稀释至同一数量级，制成的菌悬液等比例充分混合，即为本发明的混合菌剂。

本发明含油污水降解复合菌高效菌株的筛选方法为：

1.高效菌株的筛选

从环境中分离各类功能微生物的方法主要有富集培养分离和直接分离。本发明在对这两种方法的各自特点进行了深入地分析后，同时采用两种方法，综合评价，获得复合菌中的可培养菌株，从而筛选最有效的石油降解菌株。

首先清洗菌体，称取新鲜水样加入到装有无菌水的三角瓶中，36℃，120rpm，振荡30min。

进行直接分离法。对振荡均匀的样品进行梯度稀释。取稀释液到含油无机盐平板上，用无菌涂布棒涂布均匀，每个稀释度做三个平行样品，恒温培养。用接种环挑取生长速度快，生长良好的菌落在固体平板上三区划线，36℃，恒温培养。对三区划线后的平板长出的单菌落进行镜检，确认为单菌落后挑取该菌落在斜面培养基上划线，36℃，恒温培养。重复步骤六次。培养好的菌种换上灭菌的橡胶塞放于4℃冰箱中保存备用。

直接分离法完成后，进行富集分离法。将培养中处于对数生长期的菌液进行梯度稀释，取稀释度10^-5、10^-6、10^-7，涂平板，待长出菌落后，初步通过菌落形态等将其分类，用无菌接种环取各不同菌落，用三区划线法多次分纯，培养温度仍为36℃，重复划线5-6次，直至长成单一纯菌落。将菌落扩大培养。