[发明专利]一种固相萃取高效液相色谱检测方法

说明书

本发明克服现有技术不足，研究制备核酸适配体功能化的磁性材料，用于分离富集有水样中的双酚A。同时优化磁性固相萃取双酚A的条件。优化高效液相色谱法测定双酚A的方法，最终建立集分离、富集、检测一体化的磁性固相萃取‑高效液相色谱集成检测平台，用于水体中双酚A的超灵敏检测。

技术领域

本发明属于分析仪器技术领域，具体涉及基建立集分离、富集、检测一体化的磁性固相萃取-高效液相色谱集成检测平台，用于水体中双酚A的超灵敏检测。

背景技术

在分析科学的研究中，特异性强、亲和力高的分子识别元件是建立快速灵敏的分析方法的关键工具。目前，在实际应用中，抗体是分子识别主要的特异性识别材料，然而由于其自身的材料特点以及制备的流程使得它存在明显的发展瓶颈。因此，对于一些新的环境污染物常因缺乏合适的分子识别元件而难以开发其快速检测方法。适配体也是能对检测靶标特异性结合的具有特定三维结构的单链核酸分子，是一种新的分子识别探针。适配体的筛选过程称为SELEX（指数富集配体系统进化）技术，是通过随机核酸文库中筛选出的能最优识别靶标分子的具有一定二级结构的寡核苷酸分子。相对于识别和结合目标的抗体分子，适配体的获得与制备更为简单，它不需要体内免疫过程或蛋白表达，只需要基于核酸文库，由于核酸分子化学性质更为稳定，加上和抗体相当甚至更强的结合力，且易于合成与进行分子设计，所以适合于在许多靶标的相关的分析检测中应用。环境中有害微生物、生物毒素、有机污染物、重金属可以通过多种途径污染食物、饮用水、空气等，进而对人体健康及生态平衡构成威胁。对这些污染物进行快速检测及筛查是降低或避免环境污染危害的重要手段。近年来，已有许多研究者开展环境污染物适配体及相应检测方法的研究工作。

磁性固相萃取是利用磁性材料作为吸附剂剂的一种特殊的固相萃取技术。将磁性纳米吸附剂分散于样品溶液或悬浮液中，然后经过涡旋或摇床震荡动吸附一定时间，在外部磁场的作用下，富集了待测目标分析物的磁性吸附剂被从样品溶液或悬浮液中分离。选用合适的解吸剂将目标物分析物解吸下来，然后通过相关方法进行检测分析与传统的固相萃取方法相比较，磁性固相萃取有以下几个优点：该方法消耗的有机试剂较少，吸附剂经适当处理后可重复利用，绿色环保；少量的吸附剂能在短时间内将待测目标分析物从样品中分离，不需要使用固相萃取柱，避免长时间的过柱过程及过柱堵塞问题的发生，萃取程序简化；由于吸附剂自身的磁响应性，可在外部磁场作用下，将富集了目标分析物的吸附剂快速从样品溶液或悬浮液中分离，从而省去离心和过滤步骤；由于吸附剂为纳米量级、比表面积高、吸附容积高及易进行化学饰性，吸附剂对待测物有非常高的选择性；整个萃取过程易通过相关技术实现的自动化操作。基于磁性固相萃取的上述优点，该技术已经被逐渐推广用于样品分析的前处理过程中，而且取得了良好的效果，同时，最近在核酸适配体的生物传感中，也有研究工作者将磁分离技术与核酸适配体捕获探针结合作为检测平台实现了对复杂分析目标的分离、富集一体的检测。

在环境分析中，如能将核酸适配体识别捕获有机污染物分子与磁分离材料结合起来，结合高效液相色谱法检测，将具有较高的理论创新与应用创新前景。因此本项目拟通过制备核酸适配体功能化的磁性纳米材料，用于分离富集双酚A，采用磁性固相萃取-高效液相色谱联用技术，形成分离、富集、检测一体化的检测集成检测平台，实现在复杂的水样体系中分离检测双酚A的目的。

发明内容

本发明克服现有技术不足，研究制备核酸适配体功能化的磁性材料，用于分离富集有水样中的双酚A。同时优化磁性固相萃取双酚A的条件。优化高效液相色谱法测定双酚A的方法，最终建立集分离、富集、检测一体化的磁性固相萃取-高效液相色谱集成检测平台，用于水体中双酚A的超灵敏检测。

为实现本发明的上述目的，本发明采用如下技术方案：

（1）依据目标筛选相应核酸适配体序列，实现对双酚A响应。

（2）采用水热合成法合成磁性四氧化三铁纳米材料及纳米金-四氧化三铁等纳米复合材料，表征该材料表面形貌、理化性质。