[发明专利]一种脂肪酶催化合成双香豆素类化合物的方法

权利要求书

1.一种脂肪酶催化合成双香豆素类化合物的方法，其特征在于，包括：以4-羟基香豆素为底物，利用脂肪酶或牛血清蛋白催化进行Knoevenagel-Michael级联反应与式II化合物生成双香豆素类化合物，反应方程式为：

其中，Ar为4-ClC₆H₄，2-NO₂C₆H₄，3-NO₂C₆H₄，4-NO₂C₆H₄，4-OHC₆H₄，2-OHC₆H₄，4-CNC₆H₄，4-FC₆H₄，C₆H₅，4-CH₃C₆H₄，4-OCH₃C₆H₄，2-OH-3-OCH₃C₆H₃，2,6-Cl₂C₆H₃，4-C₄H₉C₆H₄，2-SC₄H₃，2-NC₅H₄，3-NC₈H₆，2-OH-4-OCH₃C₆H₃，C₅H₁₁或C₃H₇；

所选脂肪酶选自南极假丝酵母脂肪酶B，Novozym435脂肪酶，来自疏棉状嗜热丝孢菌的脂肪酶，酶褶皱假丝酵母脂肪酶，脂肪酶DF，脂肪酶RMIM或猪胰脂肪酶中的一种。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所选脂肪酶为脂肪酶RMIM。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应的溶剂为水，异丙醇，甲苯，二氯甲烷，四氢呋喃，乙腈，二甲基亚砜，N,N-二甲基甲酰胺或正己烷中的一种。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述反应的溶剂为水。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的式II化合物和4-羟基香豆素的摩尔比为1:0.5～4。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的式II化合物和4-羟基香豆素的摩尔比为1:2。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的脂肪酶在所述反应中总体积浓度为c，其中0＜c≤30mg/mL。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的脂肪酶在所述反应中总体积浓度为10mg/mL。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应的反应温度为25～65℃。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述反应温度为45℃。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应的反应时间为2～48h。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂肪酶催化合成双香豆素类化合物的方法，还包括反应完毕后过滤并回收溶剂或回收酶的步骤。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂肪酶催化合成双香豆素类化合物的方法，还包括反应完毕的后处理步骤，包括：

(1)将反应完毕后的反应混合液过滤；

(2)滤渣中加入1,4-环氧六环，之后过滤；

(3)将步骤(2)得到的滤液蒸除溶剂，所余固体产物洗涤即得。