[发明专利]一种快速恢复Steinernema carpocapsae感染期线虫的方法

说明书

本发明涉及一种快速恢复Steinernema carpocapsae感染期线虫的方法，属于昆虫病原线虫培养技术领域，本发明将S.carpocapsae感染期幼虫接种到人工卵液中，感染期幼虫恢复，收集恢复的线虫；人工卵液含有柞蚕蛹血淋巴、海藻糖、鸡蛋黄、脱脂奶粉、N’s盐溶液和水。通过本发明方法S.carpocapsae感染期幼虫恢复较快，且比例较高，2 d后恢复率可达85.24%，可应用本发明的方法快速高效的恢复S.carpocapsae感染期幼虫，从而为高效快速的培养S.carpocapsae线虫提供条件。

技术领域

本发明属于昆虫病原线虫培养技术领域，具体的说，涉及一种快速恢复S. carpocapsae感染期线虫的方法。

背景技术

昆虫病原斯氏属Steinernema和异小杆属Heterorhabditis线虫是国际上新型的高效生物杀虫剂（Georgis et al.，2006），从二十世纪30年代开始就被用于害虫的防治（Smart，1995），具有杀虫能力强，杀虫谱广，能主动搜索寄主，对人畜、环境安全等优点，易于大量培养及配制产品，并能与多种化学农药混用，对钻蛀及地下害虫有特效（Kaya andGaugler 1993；Grewal et al.，2005；Georgis et al.，2006；Yan et al.，2013；颜珣等，2014）。

昆虫病原线虫的生活史起始于感染期幼虫（Infective juveniles，IJ）携带共生细菌进入寄主昆虫体内，感染期幼虫避开昆虫的免疫反应，在昆虫血淋巴内释放共生细菌（Dowds and Peters，2002）。共生细菌在昆虫血淋巴内增殖，杀死寄主昆虫，线虫取食共生细菌以繁殖。当昆虫体内营养耗尽，3龄耐受态感染期幼虫形成，在外界环境足够湿润且温度适宜时，感染期幼虫携带共生细菌离开寄主昆虫（Brown and Gaugler，1997），搜寻新的寄主。感染期幼虫是昆虫病原线虫生活史中唯一能自由存活的龄期，可使用普通的喷雾器进行施用以防治害虫。感染期幼虫能存活1到多个月，可进行产业化培养（Wright et al.，2005）。

感染期幼虫的恢复是液体培养流程中的关键。如果恢复率低，第一代成虫数量少，仅有少部分的共生细菌被取食，第一代成虫的后代则会因为营养充足不能发育成感染期幼虫，而形成成虫。由于此时培养液中的共生细菌质量较差，第二代成虫难以产生后代，所以这个具有两代成虫的培养过程中的感染期幼虫产量会比仅有一代成虫的培养过程中的感染期幼虫产量低（Hirao and Ehlers，2010），培养时间长，收获时培养液中有高比例的其他龄期的线虫，会缩短最终线虫产品的货架时间。

发明内容

为了克服背景技术中存在的问题，本发明提供了一种快速恢复S. carpocapsae感染期线虫的方法，恢复率高，为高效快速的培养S. carpocapsae线虫提供条件。

为实现上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

所述的快速恢复Steinernema carpocapsae感染期线虫的方法，具体包括以下步骤：

1）将柞蚕蛹血淋巴、海藻糖、鸡蛋黄、脱脂奶粉、N’s盐溶液和水进行调配、混匀，得到人工卵液；