[发明专利]一种肾性贫血动物模型的构建方法

说明书

本发明提供一种小鼠肾性贫血动物模型的构建方法，包括如下步骤，1)将马兜铃酸用PBS配制成0.4mg/mL的马兜铃酸溶液；2)对小鼠腹腔注射马兜铃酸溶液，注射量及频次为：3mg/kg ip q3d，注射6周，检测贫血、肾功能指标、肾脏病理，及促红细胞生成素分泌能力；3)停药6周，再次观察上述指标。采用本发明的方法构建的小鼠肾性贫血动物模型稳定，成模率高，解决肾性贫血在慢性肾脏病的发病率较高，而目前尚缺乏成熟的肾性贫血动物模型的问题。

技术领域

本发明属于医学工程技术领域，涉及一种动物模型的构建方法，具体涉及一种以小鼠为模型动物的肾性贫血动物模型的构建方法。

背景技术

近年来慢性肾脏病(Chronic kidney disease，CKD)已成为全球性公共卫生问题，据统计我国成年人群中慢性肾脏病的患病率为10.8％(大约1.2亿)，全国有超过200万需要透析的尿毒症患者。肾性贫血是其最常见的并发症之一，其患病率为40％～60％(CastropH.Kidney Int.2010；77:269–71；Maxwell PH.Kidney Int.1993；44:1149–62)，促红细胞生成素产生或分泌不足是肾性贫血的主要原因是公认的。肾性贫血可加速肾功能的进展，诱发心血管事件，降低患者的生活质量，并与预后不良有关(Yamazaki S.Nat Commun，2013，4:1950；4.Huang L.Nephron Extra.2013；3:12–29)。发明人前期研究462例IgA肾病患者肾性贫血的患病情况，IgA肾病是CKD进展为终末期肾病(ESRD)的主要病因^[1]，更是我国导致尿毒症的第一病因，发现本组IgA肾病患者肾性贫血的患病率达28.5％，CKD3期的患者贫血比率已达42.9％，提示肾功能中度受损时，就需针对肾性贫血给予重视及必要的临床干预；随着肾功能不全的加重，IgA肾病患者肾性贫血的患病率增加，CKD5期时贫血比率可达100％。IgA肾病患者发生肾性贫血的类型主要是正细胞正色素性贫血。重度肾小管萎缩/间质纤维化是IgA肾病患者肾性贫血发展的重要影响因素。

为了深入研究肾性贫血的患病特征和发病机制，需要有合格的实验动物模型。发明人认为理想的肾性贫血动物模型标准应符合以下3点：(1)大鼠/小鼠血红蛋白下降＜110g/L，且血红蛋白的下降为不可逆；(2)有肾脏临床功能及病理的不可逆损害；(3)肾脏同时产生EPO减少，并可解析发生机制。

目前研究肾性贫血的动物模型主要由慢性肾衰的动物模型代替，最常见的是：5/6肾切除和腺嘌呤灌胃模型。5/6肾切除动物模型由于手术不易标准化，临床和病理表现波动大，贫血程度不重，此模型不被常用。发明人课题组前期也作过5/6肾切除大鼠模型，发现大鼠的贫血患病很不稳定，大鼠的血红蛋白多大于120g/L，无法达到肾性贫血诊断标准。(Ribeiro S.Biofactors,2016,42(3):296-306；2.Sun C C.Nephrology DialysisTransplantation.2013,28(7):1733-43)，故不建议采纳。

腺嘌呤诱发慢性肾衰竭的机制主要是高浓度的腺嘌呤通过黄嘌呤氧化作用变为极难溶于水的2、8-二羟基嘌呤，当它沉积于肾小管则引起阻塞，抑制了氮质化合物的排泄所致，其主要造成肾小管损害。在本领域腺嘌呤至今还被认为可建立肾性贫血模型。2018年初有研究报道(1.Rahman A.Plos One,2018,13；(2)日本学者做的研究)分别给予C57BL/6小鼠25mg/kg.d和50mg/kg.d腺嘌呤灌胃4周，发现50mg/kg.d组可以使小鼠出现肾性贫血，而25mg/kg.d组没有诱发出贫血。但实际上50mg/kg.d制作的模型贫血也偏轻(Hb约125g/L)，连贫血诊断都不够，更谈不上是肾性贫血。