[发明专利]一种靶向人低分化胃癌细胞的核酸适配体及其应用

说明书

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种靶向人低分化胃癌细胞的核酸适配体及其应用。所述核酸适配体序列为5’‑ACACCAAAATCGTCCGTTTCGTTTTAGTCCGTCTCTTTAGGGTGT‑3’。本发明所述的核酸适配体具有高特异性、高亲和力，在4℃，25℃，37℃均能保持良好活性。本发明的核酸适配体可作为分子探针，对人低分化胃癌细胞进行特异性成像和检测。在低分化胃癌的预测和诊治方面具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种靶向人低分化胃癌细胞的核酸适配体及其应用。

背景技术

胃癌是常见高发的恶性肿瘤，也是全球癌症死亡的第三大原因。根据腺体的分化程度，胃癌可分为分化型和未分化型。临床研究显示，中高分化胃癌，恶性程度较低，预后较好；而低分化胃癌，恶性程度较高，预后较差。此外，胃癌的分化状态还与化疗效果具有相关性。因此，准确区分胃癌组织的分化状态，对于判断预后以及指导低分化胃癌的治疗具有重要意义。但目前对胃癌组织分化状态的判断主要基于对病理切片的形态学观察，缺少基于分子标志物的高灵敏度、高特异性检测探针及方法。

核酸适配体（aptamer）是采用指数富集的配基系统进化技术（SystematicEvolution of Ligands by Exponential enrichment，SELEX）从大容量RNA/单链DNA随机文库中筛选得到的能与靶标物质特异性结合的寡核苷酸序列，被称为化学抗体。与传统的抗体相比，具有特异性强，亲和力高，稳定性好，易于进行化学修饰形成各种形式的分子探针等特点。消减Cell-SELEX是以完整细胞作为靶标进行核酸适配体筛选的技术，由于使用具有功能表型差异的靶细胞和非靶细胞进行消减筛选，可获得针对特定功能表型细胞的核酸适配体。由于筛选出的核酸适配体主要与细胞表面分子结合，特别适合用来制备分子探针进行靶细胞靶向成像分析以及作为靶向载体等。有研究将高转移细胞与低转移细胞进行消减筛选，得到能与转移细胞特异性结合的核酸适配体；有研究将病毒感染细胞与非感染细胞进行消减筛选，制备了可以特异性检测病毒感染的核酸适配体分子探针。

但目前未见以低分化胃癌细胞为靶细胞，以中高分化胃癌细胞为非靶细胞，筛选人低分化胃癌细胞特异性核酸适配体的报道。

发明内容

鉴于现有技术存在的缺陷，本发明提供了一种以人低分化胃癌细胞BGC-823为靶细胞，以中分化胃癌细胞SGC-7901为非靶细胞，经过消减Cell-SELEX技术筛选得到的能够与人低分化胃癌细胞特异性结合的核酸适配体，可以制备成分子探针进行人低分化胃癌细胞/组织的靶向成像等应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

一种靶向人低分化胃癌细胞的核酸适配体，所述核酸适配体序列如SEQ ID NO .1所示：5’-ACACCAAAATCGTCCGTTTCGTTTTAGTCCGTCTCTTTAGGGTGT-3’。

所述的核酸适配体在人低分化胃癌细胞特异性成像中的应用。

所述肿瘤包括胃癌、低分化胃癌。

所述的核酸适配体在鉴定核酸适配体靶标中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下。

1. 提供了一种新的能够靶向人低分化胃癌细胞的核酸适配体序列。所述核酸适配体具有高亲和力和高特异性：对靶细胞的解离常数Kd值为纳摩尔级（35.2 ± 1.1 nM）；对靶细胞及其它低分化胃癌细胞结合能力强，对非靶细胞及其它中高分化胃癌细胞结合能力弱或不结合，对正常细胞不结合。

2. 由于对靶细胞的结合具有高亲和力和高特异性，以及良好的温度稳定性，所述核酸适配体特别适合作为分子探针进行组织的靶向成像。采用所述核酸适配体结合量子点构建量子点探针进行胃癌患者组织的成像分析，结果显示了明显的低分化组织特异性，荧光强度为低分化组织＞中高分化组织＞正常癌旁组织。

附图说明