[发明专利]一种降钙素原单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体的应用

说明书

本发明声明一种降钙素原杂交瘤细胞株及其单克隆抗体的应用。本发明提供了分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株保藏号为CCTCC NO：C2018181，其能够稳定分泌高效价的抗降钙素原的单克隆抗体。另外，本发明还涉及上述单克隆抗体在制备检测或者定量降钙素原或其片段的免疫检测试剂的用途，该单克隆抗体可以应用于疾病的诊断或者相关领域，能够制备高亲和力PCT特异性单克隆抗体，为PCT的免疫检测提供关键原料，对于扩大其临床应用，降低医疗成本，具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种可以产生特异针对降钙素原的单克隆抗体的杂交瘤细胞系及其的产生的单克隆抗体制备方法，该杂交瘤制备的单克隆抗体可以应用于疾病的诊断或者相关领域。

背景技术

降钙素原(procalcitonin，PCT)是降钙素(Calcitonin，CT)的前体，是一种含116个氨基酸的无激素活性糖蛋白，分子量为13KD，由位于11号染色体上的CALC-I基因编码产生。PCT由降钙蛋白、降钙素、N端残基片段组成：在特殊的蛋白酶作用下N端会在57位开始被剪切，生成1～57的N残端和含有降钙素的60～116位氨基酸，同时，在91位也会被蛋白酶剪切，形成60～91位的降钙素和96～116位的降钙蛋白(katacalcin)。

PCT是上世纪九十年代才发现的细菌、真菌性感染的特异性标志物。在不存在感染的情况下，甲状腺外CALC-I基因表达被抑制，主要只局限在甲状腺和肺的神经内分泌细胞中有一定程度的表达，因此，在健康人血中PCT含量极少，通常低于0.10ng/mL。而当机体遭受严重真菌、细菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭等情况时，会诱导全身各种组织多种细胞类型的CALC-I基因表达，使PCT浓度迅速升高，甚至达到正常水平的数百至上万倍，但CT的含量则保持不变或略有增高。而在局部感染、病毒感染、过敏、自身免疫性疾病、慢性非特异性炎症等患者的血清中PCT浓度不增加或轻微增加，这就决定了PCT具有高度的特异性可作为细菌感染的特异性指标，用于细菌类疾病的鉴别诊断。

PCT在感染后2小时即可以检测到，感染后6-12小时达到峰值，12-24h为平台期，24h 后浓度下降，半衰期为25-30小时，能在一段时间维持在高水平。同时PCT水平与感染程度正相关，PCT浓度越高意味着受感染程度越严重，因此PCT水平对炎症的发生发展的诊断以及治疗预后等方面都具有重要意义。其他炎症因子如IL-6、IL-10、TNF-α在感染后2小时达到峰值，并迅速下降，不易被检测到；而C反应蛋白(CRP)在感染后24-48小时才达到峰值，且炎症控制后浓度仍保持较高水平，不利于早期诊断和治疗评价。在临床诊断治疗中，传统检测指标如体温、白细胞计数(WBC)的灵敏性和特异性均不高，而PCT与过去的生物学标记物相比，其具有较为理想的准确性和特异性，是一个理想的感染检测标志物，有助于临床的早期诊断和制定合理的治疗方案。

因此为了诊断细菌性或非细菌性炎症反应、鉴别诊断脓毒症和全身炎症反应堆的严重程度，预防抗生素滥用等，本领域迫切需要开发抗PCT单克隆抗体。PCT检测炎症的方法已获得美国食品药品管理局(FDA)的许可。近年来，PCT的检测多采用免疫学方法进行，具有特异性强、灵敏度高和容易操作等优点，包括双抗夹心免疫化学发光法、胶体金法和放射免疫法等。所有这些免疫学方法的前提都是制备针对PCT的特异性单克隆抗体，在健康人血浆中 PCT含量极低，在0.1ng/mL以下，因此，对所制备抗体的亲和力等参数要求很高。且目前检测体系所用的抗体均来自国外大公司，价格昂贵。因此，制备高亲和力PCT特异性单克隆抗体，为PCT的免疫检测提供关键原料，对于扩大其临床应用，降低医疗成本，具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种降钙素原的单克隆抗体。

本发明另一目的在于提供分泌上述降钙素原单克隆抗体的杂交瘤细胞株29A9。

本发明还有一个目的在于提供上述杂交瘤细胞29A9株的制备方法。

本发明上述目的通过以下技术方案予以实现：