[发明专利]一种甜菜耐碱胁迫的长链非编码RNA基因及其制备方法与应用

说明书

一种甜菜耐碱胁迫的长链非编码RNA基因及其制备方法与应用，属于植物生物技术领域，为了解析甜菜耐盐碱的分子机理，本发明提供了一种甜菜耐碱胁迫的长链非编码RNA基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，通过转基因烟草验证了该基因参与植物耐盐碱胁迫调控体系，为进一步解析甜菜耐盐碱分子机理提供了一个基因来源，丰富甜菜耐盐碱理论体系奠定基础。

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种甜菜耐碱胁迫的长链非编码RNA基因及其制备方法与应用。

背景技术

高通量测序技术的发展揭示基因组中90％以上的基因可转录出大量的非编码RNA。根据长度大小，非编码RNA可分为miRNA(micro-RNA)、siRNA(small interfering RNA)和lncRNA(长链非编码RNA)。lncRNA的长度在200nt以上，编码蛋白质的能力较弱，是数量最多的一类非编码RNA。

有关lncRNA的研究在动物领域取得了重大的进展，然而对植物lncRNA的功能和调控网络的研究仍处于起步阶段。对于藜科植物甜菜的lncRNA的研究鲜有报道。甜菜基因组测序的完成使得甜菜成为研究植物响应逆境胁迫的一种良好的模式植物。然而关于甜菜适应盐碱胁迫的转录组学机制以及甜菜耐盐碱相关基因的转化还鲜有报道，尤其是有关甜菜适应盐碱胁迫的非编码RNA的研究。

发明内容

为了解析甜菜耐盐碱的分子机理，本发明提供了一种甜菜耐碱胁迫的长链非编码RNA基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提供了含有权利要求1所述的甜菜耐碱胁迫的长链非编码RNA基因的重组载体或重组菌。

本发明还提供了上述甜菜耐碱胁迫的长链非编码RNA基因的制备方法，包括如下步骤：

1)将甜菜进行碱胁迫处理；

2)提取碱胁迫处理后的甜菜总RNA；

3)反转录制备cDNA；

4)以cDNA为模板，利用如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的引物序列PCR扩增制备获得甜菜耐碱胁迫的长链非编码RNA基因lncRNA LNC_008366。

进一步地限定，步骤(1)所述甜菜为甜菜品种KWS0143。

进一步地限定，步骤(1)所述碱胁迫处理是指分别将四周龄的甜菜经75mmol·L^-1盐碱液处理1、3、5和7天，所述盐碱液为NaHCO₃与Na₂CO₃的混合溶液，胁迫处理后，将不同处理天数的甜菜样品混合，用于步骤2)提取总RNA。

本发明还提供了所述甜菜耐碱胁迫的长链非编码RNA基因在提高植物盐碱胁迫抗性中的应用。

进一步地限定，所述应用包括如下步骤：

1)构建含有如SEQ ID NO：1所示的甜菜耐碱胁迫的长链非编码RNA基因的植物表达重组载体；

2)将植物表达重组载体转化宿主植物，经筛选获得具有盐碱胁迫抗性的转基因植株。

更进一步地限定，步骤1)所述构建植物表达重组载体所用的载体为pCBM。

更进一步地限定，步骤2)所述植物表达重组载体通过农杆菌介导法转化宿主植物。

更进一步地限定，所述农杆菌为农杆菌EHA105；所述宿主植物为烟草。

有益效果