[发明专利]一种构建PRMT7高表达的细胞系的方法及细胞系

说明书

本发明公开一种外源重组质粒pCDH‑puro‑PRMT7稳定过表达的乳腺癌MCF7细胞系的构建方法。具体经过PRMT7基因全长的获得，pCDH‑puro‑PRMT7质粒构建、包装病毒，病毒侵染细胞，而后嘌呤霉素筛选，扩增后获得PRMT7稳定过表达的MCF7细胞系。此细胞系的构建有助于研究PRMT7的细胞生物学功能，如PRMT7对小鼠成瘤能力的影响；对小鼠肺转移能力的影响等等。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种PRMT7高表达的乳腺癌细胞系的构建。

技术背景

乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁妇女生命。在我国，乳腺癌的年发病率呈逐年上升趋势。虽然早期诊断和治疗措施得以改善，但未能明显减少乳腺癌病人的死亡率。因此对乳腺癌肿瘤发生机制的探索一直是科研工作者研究的焦点，对于提高肿瘤的诊断和治疗水平具有重要意义。

精氨酸甲基转移酶(Protein Arginine Methyltransferases，PRMTs)是一种依赖于甲基供体的精氨酸甲基转移酶，催化甲基基团从S-腺苷甲硫氨酸(SAM)转移到靶蛋白精氨酸胍基的氮原子上，导致甲基精氨酸和S-腺苷高半胱氨酸的形成。精氨酸甲基化修饰分为4种类型，ω-aDMA：将两个S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine，SAM)转移到精氨酸胍基的一个末端氮原子上，催化非对称二甲基化的形成；ω-sDMA：将两个SAM转移到精氨酸胍基的两个末端氮原子上，催化对称二甲基化的形成；ω-MMA：将一个SAM转移到精氨酸胍基的一个末端氮原子上，催化单甲基化的形成；δ-MMA：将一个SAM转移到精氨酸胍基的内部氮原子上，催化单甲基化的形成。

PRMT7在核质中均存在，含有两个甲基转移酶结构域，可以对组蛋白H4R3和H2AR3进行对称二甲基化修饰(H4R3me2s、H2AR3me2s)，与基因的转录抑制相关，对组蛋白H3R2进行对称二甲基化修饰(H3R2me2s)，与基因的转录激活相关，一些非组蛋白也可被PRMT7甲基化修饰。有文献报道PRMT7参与了多种生物学事件的发生。已有报道表明，精氨酸甲基转移酶PRMT7在高恶性的乳腺癌细胞中高表达，能够诱导乳腺癌细胞发生EMT，促进乳腺癌的转移，在癌症的发生发展中起重要作用。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种PRMT7高表达的MCF7细胞系的构建方法。

本发明公开一种外源重组质粒pCDH-puro-PRMT7稳定过表达的乳腺癌MCF7细胞系的构建方法。具体经过PRMT7基因全长的获得，pCDH-puro-PRMT7质粒构建、包装病毒，病毒侵染细胞，而后嘌呤霉素筛选，扩增后获得PRMT7稳定过表达的MCF7细胞系。此细胞系的构建有助于研究PRMT7的细胞生物学功能，如PRMT7对小鼠成瘤能力的影响；对小鼠肺转移能力的影响等等。

附图说明

图1：为真核表达载体pCDH-EF1-MCS-puro。

图2：为转染空载体和PRMT7过表达质粒，MCF7细胞中PRMT7的表达的western blot结果图。

具体实施方式

现结合实例，对本发明做进一步说明。实例仅限于说明本发明，而非对本发明的限定。

PRMT7编码(CDS)序列：