[发明专利]一种人绒毛膜促性腺激素及β亚单位的免疫测定方法及其系统

说明书

本发明涉及光激化学发光技术领域的一种人绒毛膜促性腺激素及β亚单位的免疫测定方法、一种用于鉴定人绒毛膜促性腺激素及β亚单位免疫测定的系统和一种检测人绒毛膜促性腺激素及β亚单位的试剂盒；以及另一种人绒毛膜促性腺激素及β亚单位的免疫测定方法、另一种用于鉴定人绒毛膜促性腺激素及β亚单位免疫测定的系统和另一种检测人绒毛膜促性腺激素及β亚单位的试剂盒。

本申请是申请日为2016年11月22日，申请号为201611026623.1，发明名称为“免疫测定方法、用于鉴定免疫测定的系统和试剂盒”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及光激化学发光技术领域，具体涉及一种人绒毛膜促性腺激素及β亚单位的免疫测定方法、一种用于鉴定人绒毛膜促性腺激素及β亚单位免疫测定的系统和一种检测人绒毛膜促性腺激素及β亚单位的试剂盒；以及另一种人绒毛膜促性腺激素及β亚单位的免疫测定方法、另一种用于鉴定人绒毛膜促性腺激素及β亚单位免疫测定的系统和另一种检测人绒毛膜促性腺激素及β亚单位的试剂盒。

背景技术

免疫学检测是基于抗原抗体特异性反应的原理进行的，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对被测物进行显示或信号的放大，因此常被用于检测蛋白质、激素等微量生物活性物质。

化学发光免疫分析则是近年来发展较迅速的非放射性免疫检测技术，其原理是利用化学发光物质进行信号的放大，并借助其发光强度，对免疫结合过程进行直接测定，该法已成为免疫学检测的重要方向之一。

光激化学发光法是化学发光分析技术的常用方法之一，可用于研究生物分子间的相互作用，临床上主要用于疾病的检测。该技术整合了高分子微粒技术、有机合成、蛋白质化学及临床检测等相关领域的研究。它通过感光微粒和发光微粒在一定范围内结合，产生离子氧能量的传递，发出光信号，从而对待测样本进行检测。其中，感光微粒内部填充有感光化合物，而发光微粒内部填充有发光化合物和镧系元素。在红色激光(600～700nm)的激发下，感光微粒释放出高能态的单线态氧离子(4μS)，其传播距离约为200nm。当感光微粒和发光微粒的距离足够接近时，感光微粒释放的单线态氧离子能到达发光微粒，并通过一系列的化学反应，发射出520～620nm高能级的光，而被仪器检测到。在本反应体系中，微粒的浓度很低，碰撞几率较小，本底信号微弱。只有在感光微粒和发光微粒通过免疫反应结合以后，才会发射出明显的光，因此系统的灵敏度很高。在疾病诊断中，常用的检测模式包含三到四个组分：包被抗原或抗体的发光微粒、生物素或地高辛标记的抗原或抗体、亲和素或抗地高辛包被的感光微粒，中和抗原或抗体等。以上各组份通过两步以上温育反应与待测抗原或抗体结合，并通过化学发光量的强弱对待测样本进行定性或定量检测。与传统的酶联免疫分析方法相比，它具有均相、灵敏度高和操作简便易于自动化等特点。因此，其应用前景十分广阔。

对于双抗夹心的检测模式中，当待检测物质浓度高到一定浓度时，会因为不能形成双抗夹心复合物从而信号值偏低的现象，称为高剂量-钩状效应 (HD-HOOK效应)。也就是说，高剂量-钩状效应是指在双位点夹心免疫实验中，其剂量反应曲线的高剂量区段，线性走向不是呈平台状无限后延，而是向下弯曲状，似一只钩子，导致产生假阴性的现象。

HD-HOOK效应在免疫检测中经常发生，其发生率占阳性样本30％左右。由于HD-HOOK效应的存在导致被检测样本不能被正确区分为是由于其浓度超出检测试剂盒的线性范围还是本身浓度就是该值，以至于实验误诊，尤其是导致假阴性率上升。

具体来说，一方面，在检测高浓度的样本时，高剂量-钩状效应可能导致检测信号偏低，样本也因此被判读为偏低浓度。既往的解决办法是增加试剂的组分，对待测样本进行稀释或进行两步法检测等。

另一方面，因为高剂量-钩状效应，当样本浓度的升高到一定值时，信号并不能持续升高，限制了检测范围。既往主要通过优化抗体或提高抗体来拓宽检测范围。

常规检测流程有以下5个步骤：反应孔中加入待测物及试剂、第一步温育、添加通用液、第二步温育和读数。