[发明专利]一种心脏血管靶向的噬菌体载体及其用途

说明书

本发明公开了一种心脏血管靶向的噬菌体载体及由该噬菌体载体包装后的噬菌体。本发明所述的心脏血管靶向的噬菌体载体具有能高亲和性靶向心脏血管的短肽MI₁编码序列，具有重组腺病毒顺式作用元件序列和血小板源性生长因子B基因(PDGF‑B)，所述噬菌体载体称为pMI₁‑AAVP‑PDGF‑B载体。本发明还提供了所述的心脏血管靶向的噬菌体载体以及噬菌体用于制备治疗心肌梗死的药物的用途。对急性心肌梗死心脏实施含pMI₁‑AAVP‑PDGF‑B载体的噬菌体静脉注射治疗，或经血管介入使用，能有效靶向促缺血心肌血管新生，从而能实现有效减小缺血心肌梗死面积的疗效。

技术领域

本发明属于基因治疗和生物医药领域，涉及一种噬菌体载体，尤其是涉及一种心脏血管靶向的噬菌体载体及含该载体的噬菌体，以及该噬菌体载体和含该载体的噬菌体的制备方法，以及用于制备治疗心肌梗死的药物的应用。

背景技术

目前国内外尚无能根治缺血性心肌梗死的药物，也没有任何能为临床使用对缺血性心肌梗死能实施靶向治疗的药物。研发经静脉使用、能特异性靶向促缺血心肌血管新生的基因治疗药物是实现有效治疗缺血性心肌梗死的希望所在。前期研究已经成功筛选到能特异性靶向心脏血管的短肽序列MI₁，并已经获得相应的发明专利(专利号：201110388369.0；授权公告号：CN102504015B；专利名称：一种心脏血管靶向型短肽MI-1与应用)，本发明是在该已获专利成果基础上进一步研发能特异性靶向促缺血心肌血管新生的基因治疗载体。

目前基于腺病毒源性载体介导的基因治疗，已经被系列基础及临床前研究证明具有可行性、有效性、安全性，但在实现其组织、器官特异性靶向时，多使用抗体表面偶联修饰，或把经筛选的短肽靶向序列插入表达在含基因治疗基因的哺乳类细胞病毒表面，但最近研究证明：上述策略能引起病毒包膜结构的改变，使经偶联修饰或插入的靶向短肽不能有效与靶标受体结合，从而导致对组织与器官特异性靶向失败。而噬菌体能通过基因操作插入对哺乳类细胞表面分子具有高亲和性的短肽编码序列，然后有效表达及展示其外表面，并能与哺乳类细胞膜的特异性表面分子结合，通过介导内吞作用而进入细胞，该特性十分合适用于构建实施靶向基因治疗用的靶向型工程基因治疗载体。且噬菌体对哺乳类细胞没有侵袭能力，一直作为抗菌的微生物用于人体，也作为能抗菌的添加剂在食品和药物中使用，故噬菌体在人体使用具有安全性。且使用噬菌体原件介导体内靶向，因对宿主的免疫源性极低，故该类载体被免疫排斥而清除率大大低于目前被广泛使用的病毒源性载体，从而使经其转入的治疗基因在哺乳类细胞内能表达时间更长。但噬菌体存在转导及表达转基因的能力不高的缺点。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种心脏血管靶向的噬菌体载体。

本发明所述的心脏血管靶向的噬菌体载体具有能高亲和性靶向心脏血管的短肽MI₁编码序列，具有重组腺病毒顺式作用元件序列和血小板源性生长因子B基因(PDGF-B)，所述噬菌体载体称为pMI₁-AAVP-PDGF-B载体。AAVP意为“腺相关病毒噬菌体”，此处是指pMI₁-AAVP-PDGF-B载体同时具有腺相关病毒元件序列和噬菌体元件序列。其中，所述的重组腺病毒顺式作用元件序列能提高靶向基因表达；PDGF-B为一种促血管新生生长因子基因。

优选地，所述重组腺病毒顺式作用元件序列是由以下元件依次组成：2型腺病毒左反向末端重复序列(L-ITR)；巨细胞病毒启动子(CMV Promoter)；β珠蛋白内含子(βglobinintron)；多克隆位点(MCS)；polyA序列(polyA)；2型腺病毒右反向末端重复序列(R-ITR)。

本发明的第二个目的是提供一种噬菌体。

本发明所述的噬菌体是以本发明所述的心脏血管靶向的噬菌体载体包装后的噬菌体。

优选地，所述噬菌体为至少1×10¹¹pfu的高滴度噬菌体。