[发明专利]一种适用于低温离心的葡聚糖凝胶层析柱的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种适用于低温离心的葡聚糖凝胶层析柱的制备方法及应用，称取葡聚糖凝胶Sephadex G‑25 3g，置入50ml柱平衡液，室温下充分溶胀。戴上一次性PE手套取少量玻璃棉glass wool填入小型医用注射针管的底部，压实，填高至医用注射针管的0.5ml刻度处，以替代商品层析柱的多孔板，注入已充分溶胀的葡聚糖至医用注射针管的2.5ml刻度处，注入过程中防止产生气泡，静置5分钟，然后置于4℃500转/分中离心1分钟，备用。与以往的脱盐器具和方法相比，既能达到理想的脱盐效果，又极大缩短了脱盐时间，节约了实验成本，具有较高的应用价值。

技术领域

本发明属于化学技术领域，具体地说，涉及一种适用于低温离心的葡聚糖凝胶层析柱的制备方法及应用。

背景技术

在植物生理生化实验中，经常需要检测酶的活性。从植物材料抽取的粗酶液通常含有许多杂质，其中过多的无机盐会严重抑制酶蛋白催化活性的表达，甚至检测不到酶的活性。传统的脱盐方法是层析或透析，分别利用商品化的葡聚糖层析柱或纤维素透析袋进行，层(透)析时间长，程序复杂，效率低，且商品价格较昂贵。纤维素透析膜(袋)的缺点：透析必须在容器中进行，时间长(需要过夜)，中间需要多次更换透析液，透析的样品越多，对容器的容积要求越大，纤维素透析膜系专用产品，必须购自相关的公司。葡聚糖凝胶层析柱：系葡聚糖经缓冲液溶胀后注入专用的玻璃层析柱制备而成。装柱长，通常柱高在15cm以上，需要的葡聚糖多；通过层析柱的过滤进行脱盐，时间长；不能在低温条件下(4℃)进行，影响酶蛋白的活性；装柱和过滤时间长，不适宜大批量样品的处理。

发明内容

本发明的目的在于去除植物材料中酶提取液中的小分子杂质，主要是盐离子和少量低分子量的有机溶剂分子，减轻这些杂质对提取液中酶活性的影响，提供一种适用于低温离心的葡聚糖凝胶层析柱的制备方法及应用。该方法取材方便，制作简单，葡聚糖装柱长度短，节省了成本；该层析柱可适用于低温离心，通过低温离心机的低速离心取代传统的过滤，极大地缩短了脱盐时间，适用于大批量样品的处理。

其具体技术方案为：

一种适用于低温离心的葡聚糖凝胶层析柱的制备方法，包括以下步骤：称取葡聚糖凝胶Sephadex G-25 3g，置入50ml柱平衡液，室温下充分溶胀。戴上一次性PE手套取少量玻璃棉(glass wool)填入小型医用注射针管的底部，压实，填高至医用注射针管的0.5ml刻度处，以替代商品层析柱的多孔板，注入已充分溶胀的葡聚糖至医用注射针管的2.5ml刻度处，注入过程中防止产生气泡，静置5分钟，然后置于4℃500转/分中离心1分钟，备用。

进一步，所述柱平衡液的成分为：25mM Hepes-NaOH pH 7.5，1mM Na₂-EDTA，5mMMgCl₂。

进一步，所述小型医用注射针管的规格为3ml。

本发明所述方法制备的适用于低温离心的葡聚糖凝胶层析柱在植物酶提取液脱盐中的应用。

进一步，所述应用具体为：将制好的层析柱置于10ml或15ml聚乙烯PE离心管内，并在层析柱上注入待脱盐的粗酶提取液，在4℃500转/分中离心5min，离心后管内的液体即为脱盐后的酶提取液。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1.自制葡聚糖凝胶层析柱，用材少，制作便捷，节省了成本；

2.与低温离心技术相结合，通过离心脱盐，极大缩短了脱盐时间，尤其适用于大批量样品的处理；

3.脱盐在低温条件下进行，有利于保护酶的活性。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

1.葡聚糖凝胶层析柱的制备