[发明专利]一种羊踯躅二萜有效部位及其制备工艺方法和用途

说明书

本发明公开一种羊踯躅二萜有效部位及其制备工艺方法，该制备工艺为将羊踯躅(Rhododendron molle G.Don)果实、花或根等药用部位粉碎成粗粉，乙醇提取后，浓缩，进行离心或过滤，取上清液依次经过大孔树脂和正相硅胶柱色谱，即得羊踯躅二萜有效部位，以闹羊花毒素III和闹羊花毒素VI计总含量计算＞50%；本发明还公开了羊踯躅二萜有效部位在制备抗类风湿关节炎药物中的用途，采用II型胶原诱导型关节炎模型、二甲苯致小鼠耳廓肿胀炎症模型、醋酸扭体法镇痛模型、热板法镇痛模型，证实该药物具有明显的抗类风湿关节炎作用，为临床提供了一种新的药物选择。

技术领域：

本发明属于中药化学领域，涉及一种羊踯躅二萜有效部位及其制备工艺方法和用途，特别是涉及一种利用乙醇提取、离心、大孔树脂和正相硅胶分离纯化制备羊踯躅二萜有效部位的工艺，并且对其进行抗类风湿关节炎药物用途的研究。

背景技术：

羊踯躅是杜鹃花科植物，别名闹羊花、八厘麻、山芝麻根、巴山虎等，我国传统中药，始载于《神农本草经》，《本草纲目》、《梁假瀛集验良方》等医药书中均有记载，羊踯躅的果实、根和花均可入药，民间常用羊踯躅治疗类风湿关节炎。现代药理学研究表明，羊踯躅根提取物具有镇痛活性、明显抑制佐剂型关节炎的作用、抑制免疫反应等作用。

羊踯躅含有二萜、黄酮及其他类化合物，其中二萜类成分是目前研究的热点。课题组前期采用II型胶原诱导型关节炎模型、体外细胞模型 (T、B淋巴细胞增殖实验、滑膜细胞实验、RAW264.7细胞实验)、抗炎镇痛动物实验模型 (二甲苯致小鼠耳廓肿胀炎症模型、醋酸扭体法镇痛模型)，对以闹羊花毒素III和闹羊花毒素VI为代表的二萜类成分以及羊踯躅各极性部位的抗类风湿关节炎活性进行评价，结果表明以闹羊花毒素III为代表的二萜类成分是羊踯躅治疗类风湿关节炎的主要成分。

但是羊踯躅果实、花或根等药用部位毒性均较大，且其是二萜类成分的含量没有合适的质量控制标准，因此，羊踯躅的临床使用受到了极大限制。因羊踯躅根、花、果实均可入药，前期含量测定结果表明，果实中二萜类成分含量是根、花中的10倍左右，对分析方法、制备工艺、得率等因素综合考虑，从羊踯躅果实中制备羊踯躅二萜有效部位更优，本发明可从羊踯躅果实、花或根等部位中获得治疗类风湿关节炎的羊踯躅二萜有效部位，为羊踯躅临床使用与新药开发提供药效物质基础。

发明内容：

本发明要解决的技术问题之一在于提供一种羊踯躅二萜有效部位的制备工艺方法。该工艺在于提供一种简便可行、提取效率高、分离纯化效果明显、得率高的利用提取、离心、大孔树脂和正相硅胶柱色谱制备羊踯躅二萜有效部位的分离纯化方法。

本发明要解决的技术问题之二在于提供采用上述制备工艺方法制得的羊踯躅二萜有效部位。

本发明要解决的技术问题之三在于提供上述羊踯躅二萜有效部位在制备抗类风湿关节炎药物中的应用。

本发明的技术问题是通过如下技术方案实现的。

在本发明的一方面，提供一种羊踯躅二萜有效部位的制备工艺方法，包括如下步骤：

A. 提取：取羊踯躅(Rhododendron molle G. Don)果实、花或根等药用部位，粉碎成粗粉，用50%-100% 乙醇溶液回流提取后，将提取液浓缩到0-20% 乙醇浓度即得浓缩液；

B. 离心或者过滤：将浓缩液静置8-12h后进行离心或者过滤，取上清液或滤液备用；

C. 大孔树脂柱色谱：将所得上清液上大孔树脂柱，吸附完毕后用纯水洗杂质，再用乙醇水溶液洗脱，得羊踯躅二萜有效部位洗脱液；将洗脱液浓缩至恒重，得羊踯躅二萜有效部位浓缩膏；

D. 正相硅胶柱色谱：将羊踯躅二萜有效部位浓缩膏拌硅胶，将拌好的样品上样，采用二氯甲烷：甲醇体系进行洗脱，得羊踯躅二萜有效部位。