[发明专利]一种霍奇金淋巴瘤的多重免疫组化分析试剂盒及其使用方法和应用

说明书

本发明提供一种霍奇金淋巴瘤的多重免疫组化分析试剂盒及其使用方法和应用，涉及多重免疫组化技术领域，本发明所述多重免疫组化分析试剂盒，其中限定了单克隆抗体组包括CD3单克隆抗体、CD30单克隆抗体、CD68单克隆抗体、CD56单克隆抗体、LAG3单克隆抗体、PD1单克隆抗体和PDL1单克隆抗体中的两种以上、不超过六种。本发明所述多重免疫组化分析试剂盒以给予免疫检查点抑制剂后的人或动物离体组织为样本进行检测，进而用于判断免疫检查点抑制剂对霍奇金淋巴瘤的作用有效性。本发明还提供了一种所述多重免疫组化分析试剂盒的使用方法，能够有效的在同一组织上标记不超过六种免疫检查点，多种标记之间无交叉反应。

技术领域

本发明涉及多重免疫组化技术领域，尤其涉及一种霍奇金淋巴瘤的多重免疫组化分析试剂盒及其使用方法和应用。

背景技术

淋巴瘤是起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤，按病理可以分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。2015年中国淋巴瘤估计新发病例数为8.8万。霍奇金淋巴瘤依据形态学和免疫表型分为结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤和经典型霍奇金淋巴瘤(classicalhodgkin lymphoma，cHL)两大类，后者再分为富含淋巴细胞型、混合细胞型、结节硬化型和淋巴细胞削减型4个亚型。根据一项包含10002例中国淋巴瘤患者的病理分型分析中，霍奇金淋巴瘤的比例为8.54％，其中cHL占霍奇金淋巴瘤总体93.56％。霍奇金淋巴瘤一线治疗的治愈率约为85％，15％的患者为复发或难治性霍奇金淋巴瘤。对于复发或难治性cHL，欧美国家的二线标准治疗为大剂量化疗联合自体造血干细胞移植。由于国内的患者对移植治疗接受度低、医疗资源有限，接受自体造血干细胞移植的患者十分有限，中国复发或难治性cHL患者二线治疗通常为化疗。

免疫检查点是一类免疫抑制性的分子。它们的生理学功能是调节免疫反应的强度和广度，从而避免正常组织的损伤和破坏。而肿瘤细胞往往利用免疫检查点的特性来逃避免疫细胞的攻击。目前已经通过临床验证的免疫检查点包括CTLA-4和PD1/PD-L1，其中靶向PD1/PD-L1的免疫检查点抑制剂因较好的安全性和较广的适应症具备更好的临床应用前景。PD-1/PD-L1的结合对于调节T细胞激活和维持外周免疫耐受发挥重要作用。当T细胞不表达PD-1时，T细胞与抗原递呈细胞相互作用，使T细胞活化扩增并分泌活化细胞因子，作用于肿瘤细胞则表现为对肿瘤细胞的杀伤；活化后的T细胞开始表达PD-1，当其与抗原递呈细胞或肿瘤细胞上的配体PD-L1结合后，PD-1传递的抑制信号就会抑制T细胞的增殖和活化细胞因子的分泌，使T细胞功能降低，多数肿瘤细胞即通过这种机制逃避免疫细胞攻击；如果用药物阻断PD-1和PD-L1间的相互作用，就可以恢复T细胞的活性和杀伤癌细胞的能力。

免疫抑制PD-1/PD-L1通路可能在cHL疾病发生发展起到重要作用，一项研究报道了cHL中肿瘤细胞(Reed Sternberg cell，RS细胞)PD-L1的表达情况。在这项研究中，结节硬化性cHL阳性率为65％(87/134)，混合细胞性cHL为81％(60/74)，富含淋巴细胞性cHL为90％(9/10)，淋巴细胞削减性cHL为67％(4/6)。cHL中RS细胞PD-L1的高表达通常由9p24.1位点(该位点包含PD-L1、PD-L2和JAK2基因)的拷贝数异常引起。一项包含108例cHL的研究中，采用FISH检测PD-L1和PD-L1的拷贝数，发现多倍体为5％(5/108)，拷贝数增加为61％(56/108)，扩增为39％(36/108)。JAK2可激活下游的转录因子(STAT)，进一步增加PD-L1的表达。此外，EB病毒感染也可引起PD-L1表达增加。由于PD-L1的表达可以引起RS细胞的免疫逃逸，因此阻断PD-L1/PD1通路的信号可能促进解除免疫抑制，促进免疫系统对RS细胞的清除。

所以，检测霍奇金淋巴瘤微环境中免疫细胞亚群及免疫检查点分子的情况，对于预测患者应用免疫检查点抑制剂药物是否有效是非常有利的。