[发明专利]一种鉴定气胸生物标记物的方法及其检测试剂盒

说明书

本发明提供了用于鉴定气胸的生物标记物及其应用。所述生物标记物为患者血清经过柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱(HPLC)得到的游离葡萄糖和甘露糖。本发明的技术方案具有前处理简单，分析时间短，仪器价格合理，符合常规使用，操作步骤简单易学，检测结果准确性高，只需采血进行HPLC仪分析便可区分正常人和患者，并且所需血清量极少，采血量小于1mL等优点。所得结果显示此分析方法可以快速分析血清中游离的甘露糖和葡萄糖，并可以计算得到甘露糖、葡萄糖糖浓度及二者峰面积，对于研究血清游离甘露糖和葡萄糖与疾病之间的关系、寻找新型气胸疾病临床检测的标志物有着非常重要的意义。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及用于鉴定气胸的生物标记物及其检测应用。

背景技术

气胸(pneumothorax)是指气体异常进入胸膜腔，导致胸膜腔内压力增高，肺组织受到压迫，吸气受限的病症，是呼吸科常见急症，严重者可危及生命，及时处理可治愈。通常气胸分为三大类：自发性气胸、创伤性气胸和人工气胸。自发性气胸(spontaneouspneumothorax) 是由于肺部疾病使肺组织和脏胸膜破裂，或由于靠近肺表面的微小泡和肺大泡破裂，肺和支气管内空气进入胸膜腔所致。自发性气胸多见于男性青壮年或患有慢支、肺气肿、肺结核者。起病大多急骤，但也有发病缓慢，甚至无自觉症状，部分病人发病前可有剧烈咳嗽、持重物、屏气或剧烈运动等诱因。胸片是最常应用于诊断气胸的检查方法，CT对于小量气胸、局限性气胸以及肺大疱与气胸的鉴别比X线胸片敏感和准确。肺功能检查对检测气胸发生或者容量的大小帮助不大，一般不推荐采用。胸腔镜检查可明确胸膜破裂口的部位以及基础病变，同时可以进行治疗。根据临床症状、体征及X线表现，诊断本病难度不大，然而也常常出现误诊，尤其是阻塞性肺气肿并发自发性气胸时，与其原有的症状和体征常易混淆，不易诊断。如何精确识别气胸的易感人群以便早期干预，或能否筛选合适的生物标志物以预测疾病治疗的效果或者预测疾病的进展具有重要临床价值。

人体血清游离单糖中葡萄糖的含量最高，正常体检人群的范围为3.90～6.16mmol/L。目前，医院检验科可以直接通过测生化指标检测葡萄糖浓度，暂时不可以直接检测甘露糖浓度。健康成人血浆中游离甘露糖的浓度范围为20～80μmol/L。甘露糖的含量约为葡萄糖含量的 1％。它大部分被认为是由细胞中的葡萄糖异构化而来。而近来有研究表明，细胞中流出的游离的甘露糖是哺乳动物血液中游离甘露糖的主要来源。这两部分来源的游离甘露糖维持着血清中甘露糖的稳定。D-甘露糖是糖蛋白，细胞表面糖缀合物和糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白等结构中必需的单糖。其中，甘露糖是各种多糖复合物中N-糖链的重要组分，N-聚糖中的甘露糖残基来源于血液中的葡萄糖或甘露糖。游离甘露糖是正常的血浆成分。目前，血清甘露糖的测定方法主要有酶法、气液色谱法、高分辨液相层析、气液色谱-质谱法和毛细管电泳法等。但这些方法均存在一定的不足之处。比如，使用酶法、气液色谱法和高分辨液相层析时，为避免高浓度的葡萄糖的影响需要将其去除，致使前处理过程比较繁琐；气液色谱-质谱法仪器价格昂贵，不适合常规目的；所需血清样本量大。目前没有文献报道柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱法同时检测气胸患者血清中游离的甘露糖和葡萄糖。

因此，建立高效准确的血清中游离甘露糖的检测方法，对于研究血清游离单糖与疾病之间的关系、寻找疾病临床检测的标志物有着非常重要的意义。

单糖的PMP衍生法是目前较为常用的单糖检测方法。该方法包括以下几个步骤：(1) 为PMP创建碱性条件，(2)加入PMP，在70℃进行衍生，(3)调节衍生后的溶液pH，将残余PMP萃取出来。发明专利CN 103969371 B公开了“一种血液降解得到并检测单糖的方法在癌症检测中的应用”。该发明专利首先将血清样品通过酸降解，将其中的多糖和糖蛋白降解为单糖组分；然后经过PMP衍生和高效液相对降解后得到的8种单糖进行检测。相比降解前的血清，样品组分与性质已经发生巨大变化。虽然单糖的PMP衍方法在各个领域应用比较广泛，但目前尚无报道将该方法应用于气胸患者的血清中游离甘露糖和葡萄糖的检测。

发明内容