[发明专利]一种血清中胆固醇的检测方法

说明书

本发明公开了一种血清中胆固醇的检测方法，包括如下步骤：(1)将β‑CD@AuNPs、CQDs和适量以无水乙醇为溶剂制备的胆固醇储备液混合后，配制不同浓度的胆固醇标准溶液，于特定荧光条件下绘制工作曲线；(2)获得待测血清，进行检测；(3)将步骤(2)的检测结果代入工作曲线中，得到待测血清中的胆固醇浓度。本发明不仅能够克服色谱法，电化学法，比色法，等离子体吸收光谱法等技术的缺陷，且具检测线性范围广、灵敏度较高、选择性好等优势。

技术领域

本发明属于生物小分子分析检测技术领域，具体涉及一种血清中胆固醇的检测方法。

背景技术

胆固醇最早是从胆石中发现的，其广泛存在于动物体内，是所有动物细胞膜的基本结构成分，在维持膜结构完整性和流动性方面发挥重要作用，而且合成胆汁酸，维生素D和激素都需要胆固醇做原料。健康人血清中总胆固醇的正常水平一般低于5.2mmol·L^-1。血液中胆固醇水平过高，称为高胆固醇血症，会明显增加冠心病，高血压和动脉粥样硬化等血管疾病的风险。另一方面，胆固醇的缺乏被认为与抑郁症、癌症和脑出血等疾病的出现相关联。随着生活水平的提高，胆固醇异常导致的冠心病、糖尿病和高血压等疾病呈增长趋势，并且胆固醇被世界卫生组织国际癌症研究机构列为3类致癌物。因此，开发一种检测血清中胆固醇含量的方法具有极为重要的意义。

目前开发了多种分析方法用于胆固醇含量的检测，如色谱和电化学结合法，色谱法，电化学法，比色法，等离子体吸收光谱法等。但是大多数方法需要繁琐的实验过程且实验成本高；或者依赖于胆固醇氧化酶的高选择性催化反应进行胆固醇测定，但是此方法中酶易失活导致方法的不稳定性和成本昂贵；或者方法中使用了具有危害性的化学试剂。因此，有必要开发一种选择性高，成本低，绿色环保的方法进一步改善目前方法的缺陷。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种血清中胆固醇的检测方法。

本发明的技术方案如下：

一种血清中胆固醇的检测方法，包括如下步骤：

(1)将β-CD@AuNPs、CQDs和适量以无水乙醇为溶剂制备的胆固醇储备液混合后，配制不同浓度的胆固醇标准溶液；将荧光激发波长固定在390nm，分别记录不同浓度的胆固醇标准溶液的荧光发射光谱，以荧光发射峰Em＝528nm的强度作为定量依据，以荧光恢复效率(F-F₀)/F₀对不同胆固醇浓度做线性拟合，测定检测限，F₀为不加胆固醇的荧光发射峰Em＝528nm的强度，F对应不同胆固醇标准溶液的浓度的荧光发射峰Em＝528nm的强度；当胆固醇浓度为10-210μmol·L^-1，荧光恢复效率(F-F₀)/F₀与胆固醇浓度呈现良好的线性关系，获得线性工作曲线y＝0.0052x-0.0139，R²＝0.996，y＝(F-F₀)/F₀，x为胆固醇浓度；上述β-CD@AuNPs是以氯金酸(HAuCl₄)溶液为前驱体，以β-环糊精(β-CD)为还原剂和稳定剂，加热回流一步制备而成，上述CQDs是以氯化十六烷基吡啶(CPC)溶液为前驱体，通过超声一步法合成；

(2)将新鲜血液于室温下保存过夜，隔天取其中淡黄色的上清液离心，获得血清；在上述血清中加入0～160μmol·L^-1的胆固醇标准溶液，根据步骤(1)的参数进行荧光测定，重复测定至少三次，获得相应的荧光发射峰Em＝528nm的强度；

(3)将步骤(3)获得的荧光发射峰Em＝528nm的强度代入上述线性工作曲线中，获得血清中的胆固醇浓度。