[发明专利]一种基于磁棒法的单人份化学发光免疫检测方法及系统

说明书

本发明公开了一种基于磁棒法的单人份化学发光免疫检测方法及系统，该方法利用磁棒吸取磁珠加入到试剂内进行反应或清洗，传统的化学发光免疫检测方法则利用磁吸试剂管侧壁，再用取液针自底部吸走液体，与后者相比，本发明的方法携带污染少，清洗彻底，清洗次数少。本发明的方法还采用一定频率持续震荡混合的方式进行反应，有利于磁微粒一直处于均匀悬浮状态，使抗原、抗体分子之间的反应自由、畅通，结合充分，缩短样本检测时间，提高检测灵敏度。本发明的方法和检测系统适用于单人份化学发光免疫检测，避免了目前100人份检测存在的试剂变质、灵敏度降低、资源浪费和不适用于基层医疗机构的问题。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种基于磁棒法的单人份化学发光免疫检测方法及系统。

背景技术

化学发光免疫分析技术以其检测灵敏度高、分析范围宽、检测指标覆盖面广等特点而成为临床检验分析的主流技术。但根据我们的观察研究和临床使用情况的反馈，传统化学发光免疫分析技术仍然存在多个缺陷。

首先，传统化学发光免疫试剂盒包装量过大，不能满足基层医院的使用需求。大三甲医院在所有医院中只占很小部分，绝大多数医院群体是样本量偏小的社区、乡镇、县级等基层医院。传统发光试剂盒通常采用以100测试/盒进行包装，即一盒试剂含100人份的量，这就会导致100测试/盒的试剂在开瓶有效期(1个月)内无法用完。而试剂在长时间存放过程中，由于需反复开瓶使用，且辗转于2℃～8℃冰箱和仪器试剂仓，会引起试剂各组份液体的严重挥发。另，由于试剂盒重复使用次数过多，由不同人甚至是同一人操作，都可能会出现封口或盖盖儿顺序颠倒、混乱的情况，这样会使试剂各组份之间产生交叉污染，导致组份变质失效，无法使用。以上种种情况均会导致医院和厂家资源的浪费，以及由于成分挥发和试剂污染增大检测背景噪声对检测灵敏度的干扰。

其次，传统化学发光免疫分析系统庞大，结构复杂，操作繁琐。传统化学发光免疫分析仪如专利CN107831322A(图1)和专利CN108226549A(图2)中所述，具有试剂盘、取样针、针头、清洗机构及其配套装置、多个移动臂及其电机、抽液泵及其电机等结构，导致系统体积庞大，占地面积大，对医院检验科的规模和场地都提出较高要求，而且增加了厂家生产难度。传统化学发光免疫分析仪的操作模块必须考虑非常复杂的时序逻辑如专利CN108226549A所述，导致操作系统使用复杂，每次装机验收时，都需要企业技术支持人员对医院专业人员进行详细的书面授课和实操培训。

此外，传统化学发光免疫分析方法还存在携带污染多和反应液混匀不充分的问题。

传统化学发光免疫分析方法每个测试的反应、清洗、检测等步骤均在一支反应管中完成，清洗时用磁铁在外壁吸附磁珠，向管内注入洗液和吸走(或倾倒)废液交替进行，但由于始终在一个管内，管壁的吸附作用会导致管壁残留各种液体，如样本、磁珠工作液、酶工作液等等，清洗步骤必须进行3～6遍，繁琐、复杂，而且无法做到彻底洗净，不可避免地始终携带污染：而携带污染这一考核化学发光系统最关键、最核心的指标，一直是传统化学发光免疫研究人员无法攻克的难题。另由于清洗不够彻底，高值样本、酶结合物、洗液等在管壁会产生吸附和残留，进而产生检测背景值高，信噪比不理想，灵敏度不佳的结果。

传统化学发光免疫分析方法，无论是磁微粒上的抗体与样本中的抗原反应，还是磁微粒上的抗原抗体复合物与酶结合物中的抗体反应形成双抗体夹心“三明治”结构的免疫复合物，反应过程均处于37℃(或其它设定温度)静置状态，此时磁微粒会因为重力影响逐渐下沉，无法一直处于均匀悬浮状态，这就导致抗原、抗体分子之间的反应空间受阻，抗原、抗体分子之间结合不充分，不能在短时间内达到反应平台期，这既会影响样本检测时间，还会影响检测灵敏度。

虽然在CN106546732A、CN104090101A、CN106290864A等专利申请中公开了一些灵敏度高、准确性好的化学发光免疫试剂盒及其检测方法，但是都未能解决上述的问题。

发明内容