[发明专利]一种热稳定的基因VIII型新城疫弱毒株外源基因表达载体

说明书

本发明涉及兽医病毒分子生物学领域，公开了一种热稳定的基因Ⅷ型新城疫弱毒株外源基因表达载体，所述表达载体是新城疫病毒NDV‑rAHR09‑GFP‑1，它的保藏号为CCTCC NO:V201844。研究表明，NDV‑rAHR09‑GFP‑1在自然条件下具有良好的热稳定性，56℃、90min仍保持血凝活性和感染能力，能稳定表达GFP基因。

技术领域

本发明属于兽医病毒分子生物学技术，具体涉及一种热稳定的基因VIII型新城疫弱毒株外源基因表达载体。

背景技术

新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)属于副粘病毒科、副粘病毒亚科、禽腮腺炎病毒属(Avulavirus)的成员[Mayo,M.A.2002.Virus taxonomy-Houston 2002.ArchVirol 147:1071-1076.]。NDV有囊膜，基因组为单股、负链、不分节段的RNA病毒，基因组结构模式为：3′-NP-P-M-F-HN-L-5′，依次编码6种结构蛋白：核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)和大分子蛋；(L)即核蛋白(NP)，P，M，F，HN和L蛋白。根据对鸡的毒力，NDV毒株可以为强毒(Velogenic)、中等毒力(mesogenic)和弱毒(Lentogen)三种类型。已有大量研究阐明了病毒致病性的分子决定因素[Huang Z,Krishnamurthy S,Panda A,Samal SK.Newcastle disease virus V protein isassociated with viral pathogenesis and functions as an alpha interferonantagonist.Journal of virology 2003 Aug；77(16):8676-85.]，其中大部分是关于F和HN蛋白对病毒毒力的作用，特别是一致认为F蛋白裂解位点处的氨基酸序列是病毒毒力的主要决定因素[Seal BS.Nucleotide and predicted amino acid sequence analysis ofthe fusion protein and hemagglutinin-neuraminidase protein genes amongNewcastle disease virus isolates.Phylogenetic relationships among theParamyxovirinae based on attachment glycoprotein sequences.Funct IntegrGenomics 2004 Oct；4(4):246-57.]。NDV毒力差异的分子基础主要决定于F0蛋白的蛋白酶裂解位点的氨基酸序列，强毒的裂解位点两端有成对的碱性氨基酸序列，其模式基序为¹¹²GR/K-R-Q-K/R-R-F¹¹⁷；弱毒的裂解位点则缺少聚碱性氨基酸序列，其模式基序为¹¹²-E/G-R/K-Q-E/G-R-L¹¹⁷。