[发明专利]一种快速筛查紫藤三叶青与青藤三叶青药材的方法

说明书

本发明公开了一种UPLC‑MS‑MS快速筛查紫藤三叶青与青藤三叶青的方法,包括如下步骤：将待区分的三叶青药材打粉过筛制成供试样品，加入10‑20倍量50‑70％乙醇，超声提取20‑40分钟，得供试样品溶液，随后进行UPLC‑MS‑MS系统分析，得到供试样品对应的质谱数据，进行数据分析，针对供试样品进行色谱峰提取和质谱信息表征；根据供试样品的色谱信息和质谱信息，判断判断供试样品中是否含有紫藤三叶青特有的黄酮特征化合物。该方法筛查快速、准确度高，极大简化和提高三叶青不同种质(紫藤三叶青和青藤三叶青)分析过程中的工作量。

技术领域

本发明涉及中药材分析研究技术领域，具体涉及一种以黄酮为特征化合物运用UPLC-MS/MS快速筛查紫藤三叶青与青藤三叶青药材的方法。

背景技术

三叶青是中国特有的珍稀药用植物，为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)，全草均可入药，以地下块根的药用效果最佳。其性凉，味辛、苦，无毒，具有保护肝脏、抗病毒、抗炎镇痛、抗肿瘤，临床上对麻疹并发肺炎、小儿高热、扁桃体炎等多种疾病也有显著疗效。并广泛用于多种中成药或保健品，如华佗风痛宝、结石康胶囊、金芪片等。

三叶青的产地主要分布在浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、四川等地区。三叶青种质类型主要从叶片大小和形状、表面革质程度，叶边锯齿、藤颜色和形状上区分，一般大致分为紫藤和青藤两种，二者之间在形态方面存在较大的差异，但药材形态难以区别。紫藤三叶青(又名浙江三叶青)新藤为绿色，一般2～3年后植株下部老藤逐渐变成紫色或褐色。藤本较细小，有棱角，叶片较小，块根多呈葫芦状，主要分布于浙江、江西等地。青藤三叶青(又名广西三叶青)老藤的表面青白色，藤本较粗壮，叶片较大，块根个体较大，主要分布于我国湖南、福建、广西、云南的部分地区。相比之下，青藤三叶青分布地域较广，生长旺盛，产量较高，数量较多。但一般认为青藤三叶青块根性寒，药用功效不及紫藤三叶青，传统上以浙江产紫藤三叶青为道地药材使用，故市场上紫藤三叶青的价格要远高于青藤三叶青。

三叶青中的化学成分有黄酮、黄酮苷、淀粉、还原糖、甾类化合物、氨基酸等，其中黄酮及其苷类是一类重要的活性物质。而目前关于三叶青块根的大量三叶青药理研究表明其抗肿瘤药效物质基础为黄酮类成分。由于市场需求量越来越大，使得药材价格持续飚升，然而，野生紫藤三叶青资源十分短缺，导致其野生资源被过度开采，造成严重破坏。人工栽培难度大，其药用部位地下块根生长慢，需要3～5年才能达到商品药材的要求。而且其不同产地、不同种质来源(紫藤三叶青和青藤三叶青)的地下块根产量以及有效成分含量存在明显差异。目前药材市场上三叶青种质混杂，不同种质来源(紫藤三叶青和青藤三叶青)的药材价格差异悬殊。因此市场上出现了以廉价的青藤三叶青或近缘种等常见伪品滥竽充数充当正宗紫藤三叶青进行销售以谋取暴利的现象，难以保证用药的安全性和有效性。

中药现代化步伐的加快对中药标准化提出了新的要求，标准化生产是中药产业发展和进入国际市场的关键，也是目前大力推行的GAP(Good Agriculturing Practice，中药材生产质量管理规范)的工作核心。而种质标准和科学的鉴定方法是质量标准控制和管理的前提，因此中药材鉴定的方法要满足快速、准确和标准化等要求。然而目前三叶青的鉴定方法主要依据形态学和常规化学成分分析，甚至仅依靠经验判断，尚未见到运用现代分析方法建立紫藤三叶青和青藤三叶青快速鉴定技术的研究报道。为规范三叶青市场、保障临床疗效、保护消费者利益具有非常重要的现实意义。因此，有必要开发出一种实用性高，能快速、准确鉴定不同种质三叶青的方法，解决药材市场上真伪混杂、品质良莠不齐等问题。

当前，三叶青中的化学成分研究已有报道，但以明确成分为指标的种质鉴定和质量控制却未见报道。近年来，随着分析技术的发展，超高效液相色谱(UPLC)串联三重四级杆质谱(TQD-MS/MS)由于其分离速度快、灵敏度高、测定准确性强而被广泛运用于中药及复方的分析中。