[发明专利]DRC3f抗原多肽，抗DRC3f的多克隆抗体及应用

说明书

本发明属于含有抗原或抗体的医药配制品技术领域，公开了一种DRC3f抗原多肽，抗DRC3f的多克隆抗体及应用；对DRC3f蛋白氨基酸序列的二级结构、免疫原性、亲疏水性、表面可及性等进行分析，确定合适的一段肽序列进行人工合成；将合成的多肽与马来酰亚氨活化的载体KLH、BSA偶联，将此偶联产物进行脱盐柱纯化后免疫bal/c小鼠；经过多次免疫的小鼠血清用ELISA法对抗体效价进行检测，效价达理想值后收集免疫小鼠血清，并用Protein G蛋白纯化柱纯化抗体；对纯化后抗体进行ELISA、western bot等鉴定。鉴定结果表明该多克隆抗体可特异性识别DRC3f蛋白。

技术领域

本发明属于含有抗原或抗体的医药配制品技术领域，尤其涉及一种DRC3f抗原多肽，抗DRC3f的多克隆抗体及应用。

背景技术

补体C3是人体内补体系统中含量最高的分子，同时也是补体系统的关键分子。在补体激活过程中，三条补体激活途径都需要通过活化C3形成C5活化酶。C3的活化形成C3b，则可通过CR1或H因子帮助下由I因子分解为灭活的iC3b和17肽C3f。后者在羧基肽酶-N作用下脱精氨酸，迅速生成16肽DRC3f。越来越多研究认为，DRC3f具有重要的生理功能：我们在前期研究中发现DRC3f在SSc患者血清中含量明显增加，并且与SSc疾病活动度相关；李曼等研究认为DRC3f可能是重度肝炎的生物标志物；C3f和DRC3f还能够提高血管内皮细胞通透性，二者的核心分子HWESAS还具有类生长激素样作用。由于DRC3f分子量小，检测方法受限，现阶段市面上也未有抗体销售，目前，主要是应用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of flight massspectrometry，MALDI-TOF MS)检测血清中DRC3f的含量，其具体方法是:首先分离用成套试剂购自德国Bruker Daltonics公司，具体为:将磁珠加入磁珠结合缓冲液中混匀，之后加入血清混匀并静置。将样品管放入磁珠分离器使磁珠贴壁，弃悬浮液，用磁珠清洗缓冲液清洗两次。样品管中加入磁珠洗脱缓冲液，洗脱后的上清液移入新的样品管，与磁珠稳定缓冲液吹打混匀后即可进行质谱分析。点靶时1u L的标准品与10u L基质混合后取1u L，点在600um Anchorchip标准品位置上，室温干燥后将Anchorchip靶放入质谱，选择模式:LP-Clinprot，采集范围:相对分子量1000～12000Da。

综上所述，现有技术存在的问题是：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)大多数实验室未购置，且仪器价格贵，其次实验中使用磁珠耗材费用贵，实验操作复杂，预处理耗时长且对样本纯度要求高。

解决上述技术问题的难度和意义：DRC3f分子量小只有16个多肽组成，由于没有针对该多肽的特异性抗体，现阶段只能通过基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱进行检查，限制了对DRC3f的功能研究。因此，积极寻找新的灵敏度高，特异性高的检测方法对于研究DRC3f多肽的功能及其重要，但是由于DRC3f分子量小，免疫原性一般，由于DRC3f分子量小，免疫原性一般，因此，我们通过将其与KLH耦联后免疫小鼠，以DRC3f为抗原包被96孔板，检测发现，产生了特异性的抗DRC3f的抗体。同时，我们通过WB检查发现，该抗体能够特异性的识别KLH耦联的DRC3f，但是却不能检查大鼠肝脏组织中补体C3的表达，提示该抗体具有较强的特异性，可以用于DRC3f功能研究。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种DRC3f抗原多肽，抗DRC3f的多克隆抗体及应用。

本发明是这样实现的，一种DRC3f抗原多肽，所述DRC3f抗原多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。

本发明的另一目的在于提供一种由所述DRC3f抗原多肽为免疫原为抗原免疫免疫balb/c小鼠得到的多克隆抗体。