[发明专利]长链非编码RNA-HOXA-AS2在骨组织损伤修复中的应用有效
| 申请号： | 201811177581.0 | 申请日： | 2018-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN109136227B | 公开（公告）日： | 2021-11-12 |
| 发明（设计）人： | 朱鑫星;林俊堂;于金金;钟根深;郭睿;杜江;杨芬 | 申请（专利权）人： | 新乡医学院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10;C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 广州骏思知识产权代理有限公司 44425 | 代理人： | 潘雯瑛 |
| 地址： | 453003*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 长链非 编码 rna hoxa as2 组织 损伤 修复 中的 应用 | ||
1.一种过表达载体pLV-HOXA-AS2在用于制备骨组织损伤修复的试剂中的用途，其特征在于：由HOXA-AS2基因片段与慢病毒空载体pLV构建而成；所述HOXA-AS2基因片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示，所述慢病毒空载体pLV的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO:3所示。
2.权利要求1所述的用途，其中所述过表达载体pLV-HOXA-AS2的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：采用限制性内切酶BamH I和Xba I分别对慢病毒载体pLV以及HOXA-AS2基因片段进行双酶切，并采用T4 DNA连接酶体系对酶切后的HOXA-AS2基因片段以及线性慢病毒载体pLV进行连接反应，然后转化感受态细胞，筛选阳性菌落，提取阳性菌落的质粒，得到所述的过表达载体pLV-HOXA-AS2。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述HOXA-AS2基因片段的制备方法，包括以下步骤：依据所述长链非编码RNA-HOXA-AS2的核苷酸序列，采用DNA合成仪，根据固相亚磷酰胺三酯法原理对HOXA-AS2基因片段进行双链合成，同时在其5’末端和3’末端上分别添加BamH I和Xba I酶切位点，得到含有特异性酶切位点的HOXA-AS2基因片段。
4.一种诱导型细胞在用于骨组织损伤修复的试剂中的用途，其特征在于：由权利要求1所述的过表达载体pLV-HOXA-AS2转染HEK293T细胞构建而成。
5.权利要求4所述的用途，其中所述诱导型细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：采用脂质体转染试剂，将过表达载体pLV-HOXA-AS2以及慢病毒包装质粒pSPAX2、pMD2G共同转染到包装细胞中，经培养后收集慢病毒上清液；然后，将慢病毒上清液加入到细胞载体中，经培养后得到稳定表达长链非编码RNA-HOXA-AS2的诱导型细胞。
6.一种试剂盒在用于骨组织损伤修复检测的试剂中的用途，其特征在于，含有用于检测HOXA-AS2基因表达量的特异性引物；所述特异性引物包括：
上游引物：5’-GTTCAGCTCAAGTTGAACATA-3’，
下游引物：5’-AAACCTTGTAGATAGCTTGAG-3’。
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