[发明专利]一种从元麦麸皮中制备高纯度β-葡聚糖的方法

权利要求书

1.一种从元麦麸皮中制备高纯度β-葡聚糖的方法,其特征在于：包括以下步骤：

（1）元麦麸皮粉的制备：将元麦麸皮烘干，粉碎，过60目筛网；

（2）预处理：在烧杯中加入步骤（1）所得的元麦麸皮粉和80%乙醇，搅拌均匀，倒入回流瓶中，在80℃回流2h，达到灭酶、脱脂作用；

（3）酶解：将步骤（2）所得的元麦麸皮粉溶于一定量的蒸馏水中，pH值用1mol/mLNaOH溶液调节至9.0，将溶液加热到45℃后，向其中加入碱性蛋白酶进行酶解，酶解完后煮沸10分钟使酶失活，5000 r／min离心30min，收集滤液；

（4）耐热α-淀粉酶除淀粉：用1mol/mLHCl溶液调节步骤（3）中得到的酶解液，使其pH值到5，加热到90℃，加入7.5mg/100mL耐热α-淀粉酶，酶解30min后，煮沸10min使酶失活，5000r／min离心30min，收集滤液；

（5）复合酶法除蛋白：用1mol/mLNaOH溶液调节步骤（4）中得到的酶解液，使其pH值到7.5，向溶液中加入中性蛋白酶和胰蛋白酶进行酶解，酶解完后煮沸10min使酶失活，5000r／min离心30min，收集滤液；

（6）醇沉：将步骤（5）中的滤液经过旋转蒸发浓缩，在浓缩液中倒入3倍体积95％乙醇，同时要剧烈搅拌，放置于4℃过夜,再离心，离心速率5000 r／min，时间30 min，取沉淀，将此沉淀溶解于50倍量水中，-50℃真空干燥后即得硫酸软骨素初纯品；

（7）DEAE-52纤维素柱层析：将步骤（6）中得到的β-葡聚糖初纯品溶于适量的水中，配制成10mg/mL的溶液，经DEAE-52离子纤维素柱进行层析，分别用纯水和0.05mol/L的NaCl溶液作为洗脱剂进行洗脱，流速为1mL/min，每管收集5mL，采用苯酚-硫酸法测定多糖的分布，280nm比色法检测蛋白质的分布，将所得组分浓缩后进行冷冻干燥；

（8）SephadexG-100柱层析：将经步骤（7）收集到的β-葡聚糖样品配制成5mg/mL的溶液，经Sephadex G-100柱层析进行分析，以0.1mol/L的NaCl溶液进行洗脱，流速为0.6mL/min，以每管5mL进行收集，苯酚-硫酸法逐管检测多糖的分布，280nm比色法检测蛋白质的分布；

（9）膜透析，干燥：将步骤（8）所得各组分进行适当浓缩后，置于5000-8000D透析袋中4℃透析48h，真空冷冻干燥后获得β-葡聚糖纯品。

2.根据权利要求1所述的一种从元麦麸皮中制备高纯度β-葡聚糖的方法，其特征在于：所述步骤（3）中所述料液比为1:10~1:25，优选为1:15，酶用量为元麦麸皮粉重量的0.02～0.05倍，优选为0.03倍，酶解时间为1～4小时，优选为3小时。

3.根据权利要求1所述的一种从元麦麸皮中制备高纯度β-葡聚糖的方法，其特征在于：所述步骤（5）中所述酶用量为1~3mg/mL，优选为1mg/mL，中性蛋白酶与胰蛋白酶的质量比为1:1~2:1，优选为1:2，酶解温度为35~55℃，优选为45℃，酶解时间为1.5～2.5小时，优选为2.5小时。