[发明专利]一种体外蛋白合成体系及其用于提高蛋白合成效率的方法、试剂盒

权利要求书

1.一种体外蛋白合成体系，其特征在于，包括组分：

(a) 细胞提取物

(b) 吸附剂

所述吸附剂用于提高外源蛋白合成效率；

(c) 氨基酸

(d) 无或NTPs

(e) 外源DNA分子。

2.如权利要求1所述的合成体系，其特征在于，所述组分(a)与组分(b)的质量比为0.1-10：0.1-10，较佳地，0.5-8:0.5-8，更佳地，0.8-5：0.8-5，更佳地，0.9-2：0.9-2。

3.如权利要求1所述的合成体系，其特征在于，所述吸附剂的粒径为0.5-10 mm，较佳地，0.8-4.0 mm，更佳地，1.0-2.0mm。

4.如权利要求1所述的合成体系，其特征在于，所述吸附剂选自下组：活性炭、沸石、硅藻土、树脂、硅胶、生物陶粒，或其任意组合。

5.如权利要求1所述的合成体系，其特征在于，所述细胞选自下组：细菌、酵母细胞、植物细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞、或其组合。

6.如权利要求5所述的合成体系，其特征在于，所述酵母细胞为克鲁维酵母细胞。

7.如权利要求6所述的合成体系，其特征在于，所述合成体系还包括选自下组的一种或多种组分：镁离子、钾离子、缓冲剂、能量再生系统、聚乙二醇、磷酸盐、RNA聚合酶、二硫苏糖醇(DTT)和任选的溶剂，所述溶剂为水或水性溶剂。

8.一种提高体外蛋白合成效率的方法，所述方法采用权利要求1或7所述合成体系，包括步骤：

(1)混合

将组分（b）和组分（e）以外的其他组分混合，获得混合液；

(2)加入外源DNA分子

加入一定量的外源DNA分子，获得预反应液；

(3)孵育合成

在适合的条件下，孵育一段时间T1，获得反应液，所述反应液包含由所述外源DNA编码的外源蛋白质；

其特征在于，还包括一步骤：

在所述步骤（1)或（2)之后加入组分（b）吸附剂，

或在所述步骤（3)的孵育合成过程中加入组分（b）吸附剂。

9.如权利要求8所述的一种提高体外蛋白合成效率的方法，其特征在于，在所述步骤(1)之前，还包括一步骤：（S0）预处理组分（a）细胞提取物。

10.如权利要求9所述的一种提高体外蛋白合成效率的方法，其特征在于，在所述步骤(3)之后，还包括一步骤：（S1）后处理，所述后处理包括分离、纯化或检测所述的由外源DNA编码的蛋白质。

11.如权利要求8所述的方法，其特征在于，当在所述步骤（3)的孵育合成过程中加入组分（b）吸附剂时，在孵育合成开始后2小时内进行添加。

12.一种包含权利要求1-7中任一项所述体外蛋白合成体系的试剂盒，其特征在于，包括：容器，以及单独或混合位于所述容器内的所述合成体系的组分。

13.如权利要求11所述体外蛋白合成体系的试剂盒，其特征在于，所述容器为n个，n≧1。