[发明专利]一种从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法

说明书

本发明涉及金属硫蛋白提取技术领域，公开了一种从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法。通过氯化锌诱导、多次离心提取、用填料为聚甲基丙烯酸酯的分子筛预装柱一次纯化及阴离子交换层析二次纯化的方法从虾夷扇贝内脏中提取金属硫蛋白。通过本发明的从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法所获得的两种亚型的混合物及两种亚型的单品的纯度高。并且，该方法的提取过程简单，且选用虾夷扇贝内脏为原料进行金属硫蛋白的提取，充分利用企业加工的下脚料，提高了虾夷扇贝的经济价值。

技术领域

本发明涉及金属硫蛋白提取技术领域，尤其涉及一种从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法。

背景技术

金属硫蛋白分子量低、巯基含量高，能大量结合重金属离子。它是一种目前所知的最有效的自由基清除剂，其清除自由基(·OH)的能力约为SOD的几千倍，而清除氧自由基(·O)的能力约是谷胱甘肽(GSH)的25倍，而且具有很强的抗氧化活动。目前金属硫蛋白多从兔肝、猪肝及植物中提取，从水生物中提取金属硫蛋白的研究较少。由于从不同的水生物中提取金属硫蛋白的方法和参数不尽相同，因此，从不同来源的水生物中提取金属硫蛋白的可参考性差。

中国专利申请公开号为CN104910273A的专利，公开了一种海洋生物源高效重金属脱除剂贝类金属硫蛋白的诱导、提取分离工艺。该方法包括定向诱导、缓冲溶液提取、多级超滤、微滤、纳滤提纯、葡聚糖凝胶与离子交换层析联合分离纯化等步骤。该方法提取的金属硫蛋白的纯度有待提高，且经过该方法仅能提取一种金属硫蛋白，无法同时提取两种及以上的金属硫蛋白纯品。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法。本发明的从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法提取过程简单，且选用虾夷扇贝内脏为原料提取，充分利用企业加工的下脚料，提高了虾夷扇贝的经济价值。利用本发明的提取方法所获得的两种亚型的混合物及两种亚型的单品，纯度高。

本发明的具体技术方案为：一种从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法，包括以下步骤：

（1）诱导：将活的虾夷扇贝暴露在氯化锌溶液中诱导；

（2）提取：取诱导后的虾夷扇贝的内脏，匀浆，离心提取，得到金属硫蛋白粗提物；

（3）一次纯化：将金属硫蛋白粗提物复溶，离心，用滤膜过滤，然后，进行柱色谱分离，收集洗脱液，将洗脱液冷冻干燥，获得虾夷扇贝内脏源两种亚型金属硫蛋白的混合物；

（4）二次纯化：取两种亚型金属硫蛋白的混合物复溶，用滤膜过滤，然后，进行阴离子交换层析分离，以NaCl溶液为流动相，收集洗脱液，用巯基试剂进行点滴检测，当巯基试剂显色时，将洗脱液进行脱盐处理，再次收集脱盐后的洗脱液，真空冷冻干燥即可得到两种亚型金属硫蛋白。

本发明采用虾夷扇贝的内脏作为提取金属硫蛋白的来源，经过氯化锌诱导、提取、两次纯化步骤得到两种亚型的金属硫蛋白。利用本发明的提取方法提取的金属硫蛋白的纯度高，且能够同时获得两种亚型金属硫蛋白纯品。现有技术中，虽然利用阴离子交换HPLC和电感耦合等离子体发射光谱仪能够实现两种亚型金属硫蛋白的分离，但是，利用该技术方法只能将两种亚型金属硫蛋白分开，样品经过电感耦合等离子体发射光谱仪后会被离子化，导致无法收集得到金属硫蛋白。