[发明专利]一种检测二甲戊灵的荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种检测二甲戊灵残留的荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用。该试纸条包括底板及在底板上依次搭接粘贴的样品结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品结合垫上包埋有荧光微球标记的二甲戊灵单克隆抗体，硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，检测区喷涂有二甲戊灵半抗原‑载体蛋白偶联物，质控区喷涂有羊抗鼠抗抗体，二甲戊灵单克隆抗体是以二甲戊灵半抗原‑载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，二甲戊灵半抗原是由3‑(1‑乙基丙氨)‑6‑甲基‑2,4‑二硝基苯甲醛与3‑肼基丙酸反应得到。本发明还提供了该试纸条的制备方法和应用该试纸条检测二甲戊灵残留的方法。本发明的试纸条具有灵敏度高、检测快速、操作方便、经济实用等优点。

技术领域

本发明属于农药残留检测领域，具体涉及一种检测二甲戊灵残留的荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用，其特别适用于农产品、烟草及烟草制品中二甲戊灵残留的检测。

背景技术

二甲戊灵是一种旱田作物选择性除草剂，可以广泛应用于玉米、大豆、花生、棉花、直播旱稻、马铃薯、烟草、蔬菜等多种作物田除草。目前，二甲戊灵是世界第三大除草剂，销售额仅次于灭生性除草剂草甘膦、百草枯，也是世界上销售额最大的选择性除草剂，在我国农业生产中的应用非常广泛。因此，二甲戊灵在农作物中的残留问题也受到了高度关注。GB2763-2016《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》中规定二甲戊灵在稻谷、韭菜、结球甘蓝、普通白菜、菠菜、芹菜、大白菜中的最大残留限量（MRL）为0.2 mg/kg，在糙米、玉米、棉籽、大蒜、莴苣中的MRL为0.1 mg/kg；美国规定二甲戊灵在豆类、茶叶、大蒜中的MRL为0.1 mg/kg，在韭菜中的MRL为0.2 mg/kg，在胡萝卜中的MRL为0.5 mg/kg；欧盟规定二甲戊灵在豆类、胡萝卜中的MRL为0.2 mg/kg，在芹菜中的MRL为0.1 mg/kg。国际烟草科学研究合作中心（CORESTA）规定烟草中二甲戊灵的指导性残留限量为5 mg/kg，我国尚未制定烟草中二甲戊灵的最大残留限量。

目前二甲戊灵的检测方法主要是仪器检测方法，如气相色谱法、气相色谱-质谱法、气相色谱串联质谱法，等。但是由于这些分析方法需要昂贵的大型仪器设备和专业的检测人员、前处理过程复杂、操作繁琐、检测成本高、分析速度慢，难以满足现场监测和大量样本中农药残留量快速筛查的需要。因此，开发一种不受检测设备限制并且能够实现对大批量样品进行快速检测的产品和方法成为迫切需要解决的问题。

荧光微球免疫层析技术是在荧光染料标记技术上发展起来的，作为一种免疫学检测方法，它是免疫亲和技术、免疫标记技术、免疫层析技术的结合，具有快速、操作简便等优点。相比传统标记物，荧光微球的发光强度可以随激发光的强度增强而增强，所以荧光微球标记有望提高免疫层析技术的检测限；而在微球壳结构的作用下，荧光微球具有相对稳定的形态结构，粒度均一、单分散性好、稳定性好、发光效率高、重复性好，有较好的生物相容性；且形成微球后染料荧光猝灭大大减少，发射强而稳定，且基本不受外界环境介质变化的影响。因此，荧光微球免疫层析技术同时具有检测灵敏度高、操作简便、稳定性好的优点。截至目前，市场上尚未有二甲戊灵荧光微球免疫层析试纸条出现。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种灵敏度高、操作简单、成本低、检测时间短的二甲戊灵残留检测荧光微球免疫层析试纸条；本发明的另一个目的是提供上述试纸条的制备方法；本发明的再一个目的是提供上述试纸条在检测二甲戊灵中的应用。

为了实现上述目的，本发明采取的一个技术方案是：

提供一种检测二甲戊灵残留的荧光微球免疫层析试纸条，它包括底板及在底板上依次搭接粘贴的样品结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品结合垫上包埋有荧光微球标记的二甲戊灵单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上固定有检测区和质控区，检测区喷涂有二甲戊灵半抗原-载体蛋白偶联物，质控区喷涂有羊抗鼠抗抗体，所述二甲戊灵单克隆抗体是以二甲戊灵半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述二甲戊灵半抗原-载体蛋白偶联物是由二甲戊灵半抗原与载体蛋白偶联得到，所述二甲戊灵半抗原是由3-(1-乙基丙氨)-6-甲基-2,4-二硝基苯甲醛与3-肼基丙酸反应得到，其分子结构式为：