[发明专利]白藜芦醇的用途及原始卵泡的体外激活试剂与方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及白藜芦醇的用途及原始卵泡的体外激活试剂与方法。本发明以白藜芦醇处理卵巢皮质区组织，同时激活AKT和mTOR两个信号通路关键蛋白，对SIRT1水平也存在促进作用。卵巢皮质区组织在含白藜芦醇的激活培养液中培养，可体外唤醒休眠的原始卵泡，之后便可进行手术移植。白芦藜醇是一种葡萄酒等人类食物中富含的天然物质，其对机体的毒副作用未见报道，故用于IVA的可行性和安全性值得肯定甚至优于现有IVA药物；并且，白芦藜醇能够提高应用于原始卵泡IVA的效率，即体外激活时间缩短至三十分钟，且患者只需单次手术，从而大大降低了患者的痛苦和手术费用等。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及白藜芦醇的用途及原始卵泡的体外激活试剂与方法。

背景技术

在雌性哺乳动物中，卵泡是卵巢的基本功能单元，哺乳动物的卵泡是由位于卵泡中心的、被阻滞在第一次减数分裂前期的卵母细胞、包裹在其周围的颗粒细胞及最外层的膜细胞构成。哺乳动物在出生前后其原始卵泡库即建立完成。此后，原始卵泡数目不会再增加，且随着年龄的增加会周期性地减少，因此原始卵泡是一个不可再生资源。

原始卵泡库建立之后，每次只有不到5％原始卵泡能够被激活并进入生长卵泡阶段，而卵巢中的绝大部分原始卵泡仍处于休眠状态。原始卵泡激活之后，进一步经历初级卵泡、次级卵泡、腔前卵泡、有腔卵泡和排卵前卵泡阶段最终排卵，或者在发育过程中闭锁。在人类，最后一组原始卵泡大约在50岁左右被激活。目前，人们尚不清楚为什么一些原始卵泡能启动生长，而其邻近的卵泡却能保持静止的原因。目前有关原始卵泡细胞中激素受体未见报道，故原始卵泡的起始募集可能不受内分泌激素的调控，而受卵巢自身分泌的旁分泌因子调控。目前认为自分泌、旁分泌因素以及卵母细胞和前颗粒细胞之间相互作用参与调节原始卵泡的生长启动。

原始卵泡的激活包括颗粒细胞的生长分化和卵母细胞的生长两部分。原始卵泡的激活是前体颗粒细胞和卵母细胞之间精密协调互作的过程。研究表明：原始卵泡的激活起始于前体颗粒细胞，当激活前体颗粒细胞mTOR后，可促进其胞内KitL蛋白的表达，KitL分泌到胞外后与卵母细胞膜上的受体Kit结合，继而激活卵母细胞内的PI3K信号通路，最终促进了原始卵泡的激活。已有研究证明，卵母细胞中存在的PTEN-PI3K-AKT-FOXO3A和TSC1/TSC2-mTOR两条信号通路在原始卵泡激活过程中均发挥重要作用。

近年来，以目前已知的原始卵泡激活机制中的重要蛋白为靶标，人们已将其应用于相关的临床治疗。目前，将卵巢皮质区原始卵泡在体外用相应药物处理后，唤醒休眠的原始卵泡，被称为原始卵泡体外激活(in vitro activation primordial follicle,IVA)。将体外激活的原始卵泡移植回体内，待其发育成熟后，取出卵母细胞，经体外受精之后再将胚胎移植回母体，即能够促使胚胎正常发育，最终得到出生后健康发育的婴儿。这种治疗方法为因各种原因导致卵巢早衰(如提前做过卵巢冷冻的临床癌症治疗患者)实现生育提供了可能。目前已公开的关于原始卵泡IVA的技术主要是利用AKT、mTOR激动剂或者是两种激动剂联合使用，在体外处理卵巢皮质组织，促进原始卵泡激活，其缺点是均需要一种或两种药物，并且体外组织处理时间需要24小时，这就造成患者需要经历两次手术才能完成原始卵泡的IVA过程。

白藜芦醇(Resveratrol)化学名称为(E)-3，5，4-三羟基二苯乙烯，是一种多酚类化合物，又称为芪三酚。近年来的研究表明白藜芦醇具有广泛的生物活性，但目前尚未见关于白藜芦醇对原始卵泡体外激活的作用。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供白藜芦醇的用途及原始卵泡的体外激活试剂与方法，经验证，白藜芦醇作为原始卵泡的体外激动剂，激活时间短，安全性更高。

白藜芦醇在制备mTOR激动剂中的应用。

本发明提供了白藜芦醇在制备卵巢中mTOR激动剂中的应用。