[发明专利]一种利用肠杆菌属菌株Oj06水培黑麦草的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种利用肠杆菌属(Enterobacter sp)菌株Oj06水培黑麦草的方法及其应用。对一年生黑麦草种子表面进行消毒和清洗后，使用漂浮法进行种子萌发，六天后，对幼苗进行营养液培养，每三天更换一次培养液，七天后进行镉处理，将Oj06菌悬液喷施于植物根附近，共喷施四次，每盆加菌悬液5 ml，并培养处理十天。在水培条件下，在一年生黑麦草根部附近喷施Oj06能显著促进一年生黑麦草的生长，提高一年生黑麦草体内的叶绿素含量，同时使丙二醛含量降低，促进了一年生黑麦草对重金属镉的吸收积累量。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种利用肠杆菌属菌株Oj06水培黑麦草的方法及其应用。

背景技术

随着经济的发展，重金属对环境的污染已成为全球面临的一个严峻的环境问题。其中镉具有很强的毒性，通过呼吸、饮食和饮水等途径进入人体后，可在人体的肝、肾、甲状腺和胰腺等脏器内积累，引起病变，严重时还有致癌、致畸、致突变作用。

传统的治理重金属污染的方法主要有化学处理法、吸附分离法、离子交换法、膜分离法等，但这些方法存在费用高、工艺复杂和产生二次污染等问题。近年来，生物方法尤其是植物和微生物修复法，由于具有成本低廉、效率高、无二次污染等优点，在重金属污染治理领域正发挥着越来越大的作用。

发明内容

说明：本发明中使用的肠杆菌属菌株Oj06已在非专利文献（赵会会,方志刚,马睿,娄来清,蔡庆生；耐镉根际促生菌的筛选及其对一年生黑麦草镉吸收积累的影响；草地学报；2017年3期.）中被公开，公众可向该非专利文献的作者获得肠杆菌属菌株Oj06。

本发明的一个目的在于提供了一种利用肠杆菌属菌株Oj06水培一年生黑麦草的方法。

本发明的另一目的在于提供一种利用肠杆菌属菌株Oj06在水培一年生黑麦草中的应用。

本发明采用的技术方案为：

一种利用肠杆菌属菌株Oj06水培黑麦草的方法，所述方法的具体步骤如下：

选取饱满的一年生黑麦草种子，用10%H₂O₂对种子表面进行消毒处理，15 min后，用去离子水清洗三遍，漂浮法进行种子萌发，六天后，选取生长一致的幼苗移栽至1L塑料杯中进行营养液培养（1/4Hoagland营养液，pH6.5），每三天更换一次培养液，七天后进行镉（20 μmol·L^-1，CdCl₂ 2.5H₂O）处理，以加无菌水为对照，另设肠杆菌属菌株Oj06菌悬液喷施于植物根附近为处理，移苗后第二天和第五天分别喷施一次，镉处理后的第三天和第六天分别喷施一次，共喷施四次，每盆加菌悬液5 ml，在28℃下培养处理十天，每组处理设置3个重复。

进一步地，所述肠杆菌属菌株Oj06菌悬液的制备方法为：将肠杆菌属菌株Oj06菌株活化后接入液体LB培养基中，30℃、160 r·min^-1摇床培养24 h，用离心机在3000 r·min^-1室温条件下离心10 min后，无菌水悬浮清洗两遍，最后再用无菌水重悬菌体，制备成OD600=1的菌悬液。

进一步地，所述肠杆菌属菌株Oj06应用于在水培条件下提高黑麦草对镉的富集中。

进一步地，所述肠杆菌属菌株Oj06应用于在水培条件下促进黑麦草的生长中。

本发明所述的有益效果为：（1）Oj06能促进一年生黑麦草的生长，并提高其地上部分和地下部分的生物量；（2）Oj06使得一年生黑麦草的总根长、根平均直径、总根表面积、总根体积均有显著增加；（3）Oj06对镉处理下一年生黑麦草叶片内光合色素含量的下降起到显著的缓解作用，增强一年生黑麦草的光合作用，提高其对镉的耐受性；（4）Oj06能显著缓解一年生黑麦草植株体内的膜脂过氧化作用。