[发明专利]一种靶向抗原特异性T细胞诱导其向记忆干性细胞分化的融合蛋白

权利要求书

1.一种融合蛋白，包含通过连接子相连接的细胞因子和T细胞表面受体分子结合拮抗剂或激动剂，其中，

所述细胞因子是IL-21；

所述T细胞表面受体分子结合拮抗剂或激动剂是PD-1抗体；

所述融合蛋白能够诱导激活T细胞，同时将细胞因子靶向T细胞，诱导T细胞分化，增强T细胞功能，

其中编码所述PD-1抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，编码所述细胞因子IL-21的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；或

编码所述PD-1抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示，编码所述细胞因子IL-21的核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其中，

所述PD-1抗体抑制PD-1对PD-L1的结合；和/或

所述PD-1抗体抑制PD-1对PD-L1和PD-L2二者的结合；

所述PD-1抗体是单链抗体。

3.如权利要求2所述的融合蛋白，其中，所述PD-1单链抗体为二聚体单链抗体。

4.如权利要求1-3中任一项所述的融合蛋白，其特征在于所述结构域从氨基末端到羧基末端包含如下结构：

-X-Linker1-Y-

其中：

X是PD-1抗体，Y是细胞因子，Linker1是连接子。

5.如权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于所述PD-1抗体从氨基末端到羧基末端包含如下结构：

V_H-Linker2-V_L

其中，V_H为PD-1单链抗体重链的可变区，V_L为抗体轻链的可变区，Linker2为连接子。

6.如权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于所述融合蛋白在3’端还可以包括标签序列。

7.如权利要求6所述的融合蛋白，其特征在于所述融合蛋白阻断PD-L1与T细胞表面PD-1的结合，并将IL-21靶向肿瘤特异性T细胞，诱导T细胞的分化。

8.如权利要求7所述的融合蛋白，其特征在于编码所述融合蛋白的核苷酸序列如SEQID NO:8或SEQ ID NO:20所示。

9.如权利要求8所述的融合蛋白，其特征在于所述融合蛋白在3’端还包括标签序列，所述含有标签序列的编码融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:21所示。

10.如权利要求9所述的融合蛋白，其特征在于所述融合蛋白主要是同源二聚体形式。

11.一种多核苷酸，其编码如权利要求1-10中任一项所述的融合蛋白。

12.一种表达载体，其包含与表达控制序列操作性连接的如权利要求11所述的多核苷酸。

13.一种宿主细胞，其包含权利要求12所述的表达载体。

14.如权利要求1-10任一项所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

a)通过基因工程手段方法，将细胞因子编码基因链接到PD-1抗体编码基因的C末端，成为融合蛋白的编码基因；

b)构建表达载体；

c)转染细胞，进行蛋白表达和纯化；

d)获得所述融合蛋白。

15.一种药物组合物，其包含权利要求1-10中任一项所述的一种或多种融合蛋白，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂；

和/或，所述药物组合物还包括其他抗癌药物或肿瘤疫苗，所述融合蛋白可以和其他抗癌药物或肿瘤疫苗联合使用。